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上海達(dá)為科生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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分離提取胎鼠大腦皮層神經(jīng)元的原代細(xì)胞培訓(xùn)

時(shí)間:2021-11-26閱讀:2148
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我司已成功分離并培養(yǎng)胎鼠大腦皮層神經(jīng)元的原代細(xì)胞培養(yǎng),并對(duì)細(xì)胞平臺(tái)的人員進(jìn)行培訓(xùn)。

培訓(xùn)地點(diǎn):會(huì)議室、細(xì)胞房

參與培訓(xùn)人員:細(xì)胞房技術(shù)人員

首先在會(huì)議室先講解以下基礎(chǔ)操作步驟

(1)75% (體積分?jǐn)?shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細(xì)剝大腦皮層。

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;

(4)去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。

(5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min;

(6)收集上清,臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù),按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

(7)培養(yǎng)第二天,全換液更換為種植液2;

(8)培養(yǎng)第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;

(9)之后每周換液兩次。

之后并在細(xì)胞房代領(lǐng)細(xì)胞平臺(tái)所有技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)練操作。后續(xù)并將組織細(xì)胞平臺(tái)的每位技術(shù)人員將此技術(shù)熟練操作。


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