水產(chǎn)品中氯霉素的測定 
 1.目的  使氯霉素的測定處于受控狀態(tài)，保證氯霉素檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與一致性；規(guī)范參加本項(xiàng)目檢測工作人員的操作規(guī)程。
  2.適用范圍  適用于水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的篩選檢驗(yàn)。 
 3.引用標(biāo)準(zhǔn)  《動(dòng)物源食品中氯霉素殘留檢測 酶聯(lián)免疫吸附法》農(nóng)業(yè)部1025號公告-26-2008 《氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒說明書》 深圳市芬析儀器制造有限公司 《無公害食品 水發(fā)水產(chǎn)品》 NY 5172-2002  《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》GB/T 6682-2008 《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分 總則》 GB/T5009.1-2003 
 4.概述  氯霉素屬廣譜抗生素，曾在畜牧業(yè)中廣為應(yīng)用。但氯霉素有較強(qiáng)的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用動(dòng)物中殘留，可通過食物鏈傳給人類，長期微量攝入氯霉素，不僅使人體腸道正常菌群失調(diào)，而且還會(huì)引起多種疾病，對人類的健康造成危害。世界上許多國家禁止此藥用于生產(chǎn)食品動(dòng)物，并規(guī)定了在畜產(chǎn)品中氯霉素不得檢出。 
 5.測定 
 5.1.原理      
氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的基本原理來進(jìn)行的，換句話說，就是利用酶標(biāo)記物與樣品中的氯霉素與微孔中的抗體進(jìn)行競爭反應(yīng)。在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中，如果樣品中的氯霉素殘留的越多，相對地就會(huì)競爭反應(yīng)越多的酶標(biāo)記物，使得能結(jié)合上抗體的酶標(biāo)記物相對地減少，用TMB底物顯色，樣品中的氯霉素含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出氯霉素含量。 
 5.2.儀器 
 5.2.1.CSY-E96K抗生素殘留檢測儀(配備450nm濾光片)。（深圳市芬析儀器制造有限公司）
 5.2.2.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
 5.2.3.勻漿器。 
5.2.4.振蕩器。
 5.2.5.冷凍離心機(jī)。 
 5.2.6.微量移液器:單道20μL、50μL、100μL、1000μL；多道250μL。
 5.2.7.天平:感量0.01g。
 5.2.8.氮?dú)獯蹈裳b置。   

水產(chǎn)品中氯霉素的測定 
  5.3.試劑和材料      以下所有試劑，均為分析純試劑；水為符合GB/T 6682規(guī)定的二級水。
 5.3.1.乙酸乙酯。
 5.3.2.乙腈。 
5.3.3.正己烷。 
 5.3.4.0.5N鹽酸溶液
 5.3.5.0.5N氫氧化鈉溶液 
 5.3.6.氯霉素酶聯(lián)免疫試劑盒:2℃～8℃冰箱中保存。  
5.4.樣本處理 
 a) 將3克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘。  
b) 用離心機(jī)離心1700×g10分鐘，取2mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中，于50℃下，利 用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。  
c) 在此玻璃管中加入正己烷1mL，先將殘余物*溶解后，再加入1mL樣品稀釋液，震蕩30 秒鐘。  
d) 用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘，利用吸管吸去包含中問乳化層部分的上層液(正己烷)，再 吸取下層液(水層)備用。 
稀釋倍數(shù):1  若待測物為白蝦可按以下流程將樣品做8倍濃縮以增加檢品敏感度  
a) 將6克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘。 
b) 用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘，取4mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中，于50℃下，利 用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。  
c) 在此玻璃管中加入正己烷2mL，先將殘余物*溶解后，再加入0.5mL樣品稀釋液，震蕩30 秒鐘。  
d) 用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘，利用吸管吸去包含中問乳化層部分的上層液(正己烷)，再 吸取下層液(水層)備用。 稀釋倍數(shù):0.125  
5.5.酶聯(lián)免疫測定  
5.5.1.將標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號后分別分別加入100μL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液。 
5.5.2.在其他的微孔加入100μL已完成前處理的樣品溶液。
 5.5.3.再于每一微孔另加入50μL已*回溫的酶標(biāo)記物。 
 5.5.4.輕敲酶標(biāo)板四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置1小時(shí)。  
5.5.5.將微孔中的反應(yīng)液甩掉，再將已稀釋清洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)3次。
 5.5.6.zui后一次甩掉清洗液后，在吸水紙上拍干。  
5.5.7.于每一微孔加入顯色液100μL后，輕敲酶標(biāo)板四周，使其充分混合。
 5.5.8.于室溫下避光靜置20分鐘。  
5.5.9.加入反應(yīng)終止液，每一微孔加入100μL。  
5.5.10.酶標(biāo)儀以單波長450nm或雙波長450nm/650nm讀值。    

水產(chǎn)品中氯霉素的測定   
5.6.結(jié)果判定  
5.6.1.定性判定      
用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含氯霉素濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.892；0.025ppb為1.501；0.05ppb為1.175；0.1ppb為0.751；0.3ppb為0.421；0.6ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍0.3ppb-0.6ppb;樣品2的濃度范圍0.05ppb-0.lppb。(再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)) 
5.6.2.定量判定  所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(BO)再乘以100%，即百分吸光度值。  百分吸光度值 % =B B0×100%  B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值。 BO—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值。  以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素的實(shí)際濃度。  若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。  
6.檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度  
6.1.靈敏度      本方法在魚、蝦、蟹樣品中氯霉素的檢出限為0.025ppb。  
6.2.準(zhǔn)確度  本方法的回收率為70％～130％。  
6.3.精密度      本方法樣本的變異系數(shù)小于10％。  
7.相關(guān)文件  氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒說明書（深圳市芬析儀器制造有限公司） 酶標(biāo)儀操作規(guī)程 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀操作規(guī)程 勻漿器操作規(guī)程 振蕩器操作規(guī)程 冷凍離心機(jī)操作規(guī)程 氮吹儀操作規(guī)程 天平稱量操作規(guī)程。    
   
8.注意事項(xiàng)  
1) 使用前請先將試劑盒回溫至室溫(置于室溫60分鐘以上)，各溶液皆搖勻后方可使用。  
2) 回溫后，取出所需酶標(biāo)板條，將剩余未測的ELISA孔條立即放回鋁箔袋中，置于4℃保存。
 3) 10倍樣品稀釋液與10倍清洗液請用蒸餾水稀釋10倍方可使用。(如1mL濃縮稀釋液加9mL 蒸餾水)稀釋后的1×萃取稀釋液和1×清洗液可于4℃保存一周。 
4) 萃取流程請使用P.P.材質(zhì)的15mL離心管以免腐蝕。 
5) 反應(yīng)終止液含0.5 N HCl，請小心操作。 
6) 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液含氯霉索，請小心操作。  
7) 本試劑盒的所有試劑出廠前均做過完整的測試，請使用試劑盒提供的藥品及試劑，勿任意更 換。 
 8) ELISA所得的氯霉索濃度若低于該樣品檢品敏感度即可視為該樣品背景值，無須回乘稀釋倍 數(shù)。
反之若所得的氯霉索濃度若高于該樣品檢品敏感度，即可能為氯霉索陽性樣品，建議使用其它檢測方法檢測，如GC/MS等。

水產(chǎn)品中氯霉素殘留測定儀儀器簡介：

CSY-E96S水產(chǎn)品中氯霉素殘留測定儀采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法；水產(chǎn)品藥物殘留檢測儀可定量快速檢測阿莫西林、孔雀石綠、磺胺類(總量)、重金屬、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、 紅霉素、氯霉素、土霉素、四環(huán)素、 磺胺類(總量)、喹乙醇、已烯雌酚等有毒有害物質(zhì)及抗生素殘留檢測。并且可以連接食品安全監(jiān)控系統(tǒng)。

水產(chǎn)品中氯霉素殘留測定儀技術(shù)參數(shù)：

☆波長范圍:300nm-1000nm

☆波長準(zhǔn)確度:±2nm

☆吸光度范圍: 0.000~4.000ABS

☆分辨率 :0.001Abs

☆穩(wěn)定性 : ±0.001A/hr

☆透射比重復(fù)性: ≤0.5%T

☆光源 : 進(jìn)口LED

☆樣品池 : 微孔板