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色譜分析時(shí)操作技巧

來源:上海惠分科學(xué)分析儀器有限公司   2016年09月14日 11:31  

液相溶劑瓶小改進(jìn):

     液相溶劑瓶原裝蓋上有兩個(gè)小孔,一直擔(dān)心空氣當(dāng)中的懸浮顆粒會落入瓶中,污染流動相,為了避免污染,又防止出現(xiàn)內(nèi)外壓差,對溶劑瓶做了如下小改進(jìn)。

一、大一點(diǎn)的孔用一次性針筒過濾頭堵上,另一小孔則先將一次性針筒過濾頭套入一個(gè)塑料槍頭再插入。

二、裝水相的和有機(jī)相的溶劑瓶,分別選用無機(jī)相的和有機(jī)相的一次性針筒過濾頭。

三、我曾經(jīng)用空針筒套上過濾頭推拉空氣,測試無明顯阻力,用在溶劑瓶上應(yīng)該不會產(chǎn)生內(nèi)外壓差。

四、每三個(gè)月就更換一次,保證過濾空氣效果,改進(jìn)兩年多來對液相運(yùn)行無影響。

 

 毛細(xì)管電泳法操作經(jīng)驗(yàn)

  1 斷流的可能原因

 a、有氣泡。解決辦法:所有進(jìn)入毛細(xì)管的液體都要超聲排氣,特別是容易起氣泡的溶液,如SDS。

  b、有沉淀物。解決辦法:所有進(jìn)入毛細(xì)管的液體都要過濾,濾膜孔徑要比毛細(xì)管內(nèi)徑小。

 c、毛細(xì)管有裂口,zui容易裂的地方是窗口處和毛細(xì)管出口端,有時(shí)候看不出來,因?yàn)榧訅鹤⑺臅r(shí)候仍能看到液滴出來,需要用手碰一碰才能發(fā)現(xiàn)。

 

2 基線漂移

 a、毛細(xì)管沒活化好:需要用0.1 M氫氧化鈉多沖一沖

  b、毛細(xì)管沒平衡好:沖完氫氧化鈉和水后需要用buffer再沖一段時(shí)間,這個(gè)時(shí)間得根據(jù)buffer的組成而定。必要時(shí)候需要跑空白一段時(shí)間。

  c、燈接近壽命:查看燈的使用時(shí)間,如果已經(jīng)兩千多個(gè)小時(shí)接近三千小時(shí)的話,可以考慮換燈了。

 d、毛細(xì)管壽命已到。毛細(xì)管是有使用壽命的,要看怎么保養(yǎng),當(dāng)然,還跟使用的buffer有關(guān)。有些buffer特別傷管子的。

 

3 常見緩沖溶液的使用

  緩沖溶液一般是先配好stock solution,使用的時(shí)候再進(jìn)行稀釋。但是stock solution也不能長時(shí)間存放,0.1 M 的磷酸、硼砂等溶液常溫下一個(gè)星期就會有變化,再長時(shí)間可以看到有沉淀析出。但是也不能因此放到冰箱去,因?yàn)榉诺奖湟矔谐恋砦龀?,常溫存放,然后每星期重配一次。另外,配置硼砂的時(shí)候要稍微加熱幫助溶解,不然溶解不了。但加熱也不要太猛烈,不然溶解效果也是不好。

4 sds使用注意事項(xiàng)

sds在配置過程中容易產(chǎn)生氣泡,所以如果用容量瓶來配置是不實(shí)際的。這時(shí)候就不能對sds的濃度做要求。所以,一般用量筒或者離心管配置就好了,加水的時(shí)候用玻棒引流,小心的攪拌,邊配置邊超聲促進(jìn)溶解。

5 毛細(xì)管的使用和維護(hù)

避免用強(qiáng)堿溶液長時(shí)間沖洗,比如1 M氫氧化鈉,內(nèi)壁會被腐蝕的。長時(shí)間不用的時(shí)候應(yīng)該吹干,兩端密封保存。也有人建議用水封存。

6 UV燈的使用注意事項(xiàng)

不要暴力關(guān)電,要在操作界面按關(guān)燈鍵。一般不超過兩小時(shí)暫停檢測不需要關(guān)燈,因?yàn)殚_關(guān)燈都是會對燈造成損害的。

 

 

色譜柱的清洗和修補(bǔ)技巧

  1:用色譜甲醇做流動相,以1.00ml/min的流速,反向(只適用于色譜柱兩端封口一致的色譜柱)沖洗一小時(shí),不接檢測器。

2:用異丙醇,以0.3ml/min的流速,反向沖洗三小時(shí)

3:再用甲醇,以1.00ml/min的流速,反向沖洗30分鐘。

4:連接檢測器,正向連接色譜柱,用流動性過渡,

5:基線平穩(wěn)后,進(jìn)樣。進(jìn)樣色譜圖。

  采取措施:

1:挖去柱頭污染的填料,大約1.5mm,挖去的污染填料。

2:用同種填料,濕法填平挖去的柱頭填料,篩板用異丙醇超聲15分鐘,再用水超聲5分鐘,用濾紙擦干,上好柱頭螺絲。

3:流動相沖洗30分鐘,不連接檢測器。

4:連接檢測器,過渡平衡,進(jìn)樣。

結(jié)論:根據(jù)色譜柱出現(xiàn)柱效降低,分離效果不好,嚴(yán)重拖尾,影響正常檢測的情況,進(jìn)行了反向沖洗,以及修補(bǔ),效果還是可以的,再者:對于使用效果不好的色譜柱,要根據(jù)情況作相應(yīng)的處理,如果通過清洗能解決問題的一般不要修補(bǔ),清洗不能達(dá)到使用效果的再進(jìn)行修補(bǔ)。

 

進(jìn)樣針堵塞疏通技巧

    實(shí)驗(yàn)室的氣相色譜分析時(shí),進(jìn)樣針堵塞是zui常見的問題了,前幾天做實(shí)驗(yàn),載氣流速都正常,柱子也剛老化過,出峰變低,懷疑是進(jìn)樣針有點(diǎn)兒堵了,燒了個(gè)熱水,用開水把進(jìn)樣針的針頭給燙一下,然后再用針吸幾下熱水,完了之后再進(jìn)樣試試, 發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣還算正常了!用開水煮的話可能效果會更好!

 

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