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透析去除蛋白樣品中的表面活性劑

來源:上海優(yōu)高玖貿(mào)易有限公司   2016年09月29日 10:29  

在蛋白質(zhì)生物化學(xué)中,表面活性劑廣泛用于樣品溶解,如膜蛋白或包括脂質(zhì)在內(nèi)的雜質(zhì)。此外,在蛋白組學(xué)樣品制備中,表面活性劑也變得越來越重要。但不管怎樣,下游分析會由于表面活性劑的存在而被干擾。質(zhì)譜、層析分離以及光譜讀數(shù)可能分別會由于信號抑制、復(fù)合物形成以及較高的空白值而被妨礙。

 

因此,要么選擇可與所用分析方法兼容的表面活性劑,要么在zui終的下游分析前從樣品中去除。雖然前者原理上可能更易成功,但這種方法必需根據(jù)每一個樣品和工作流程進行優(yōu)化。而從實際操作來講,第二種方法相對更簡單。

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有多種方法可以用于表面活性劑的去除,包括直接結(jié)合、凝膠過濾、透析、沉淀以及離子交換層析等。哪種方法zui合適,取決于表面活性劑的有效分子量、濃度以及其它特性。

 

但一般來講,沉淀或?qū)游龇▽τ诒砻婊钚詣]有選擇性,可能導(dǎo)致表面活性劑去除不*,分析物損失以及樣品稀釋。且蛋白質(zhì)收率較低,成本高,可獲得的蛋白質(zhì)濃度有限。

 

相對來說,透析是zui簡單、通用的處理方法。透析通過體積排阻方式去除表面活性劑,根據(jù)表面活性劑和目的蛋白的相對粒徑,表面活性劑可通過被動擴散過程,從蛋白之中分離出來。

 

表面活性劑特性簡介

 

由于表面活性劑的物理特性會影響其從樣品中去除的難以程度,所以必需對其有詳細的了解,才能確定zui合適的去除方法。

微膠粒是指溶液中多個表面活性劑單體自發(fā)形成的結(jié)合體,表面活性劑的臨界微膠濃度(CMC)是指微膠粒形成時的zui低濃度,當(dāng)高于CMC時,表面活性劑以大分子量結(jié)合體的形式存在。

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CMC同時也是表面活性劑結(jié)合到蛋白質(zhì)的強度的指標(biāo),該值較低時,結(jié)合較強,該值較高時,結(jié)合較弱。此外,CMC還是表面活性劑親水性的指標(biāo)。

對于大多數(shù)可透析去除的表面活性劑,其濃度需低于CMC,因為只有表面活性劑單體可通過這種方法去除。而某些表面活性劑,如CHAPS和辛基-β-葡萄糖苷,由于其所形成的微膠粒的分子量也不高(<10,000D),所以即使超過CMC,也可以用透析去除。

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特定表面活性劑的去除方法

 

Triton X-100(單體分子量647,微膠粒分子量90,000,CMC 0.24mM)、Triton X-114(單體分子量537,CMC0.21mM)和NP-4(單體分子量617,微膠粒分子量90,000,CMC 0.29)用于在非變性條件下溶解膜蛋白。由于這類表面活性劑CMC較低,很難直接透析去除,但有報導(dǎo)在含有CHAPS或其它微膠粒徑較小的表面活性劑的溶液中進行透析的方法。隨著CHAPS擴散進入樣品,其會與Triton X-114形成混合微膠粒,從而較低原始微膠粒徑,促進透析。

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總結(jié)
 

一般來講,相比其它分離原理,透析可使高分子量分析物的收率zui大化。由于只需要液體操作,這種原理可允許平行化和高通量操作。仕必純提供兩種膜材質(zhì) - 混合纖維素酯和再生纖維素、兩種膜級別 - 標(biāo)準(zhǔn)級和生物技術(shù)級以及超10種以上MWCO規(guī)格的透析膜產(chǎn)品,方便用戶根據(jù)不同的樣品特性和應(yīng)用目的,進行“特異性”選擇,方便并簡化實驗設(shè)計和樣品處理。

 

此外,spectrumlabs更提供可在更短時間內(nèi)完成透析的動態(tài)透析裝置。Tube-A-Lyzer動態(tài)透析裝置或常規(guī)透析膜結(jié)合循環(huán)透析槽時,通過透析液在膜外部的循環(huán)過程,使驅(qū)動小分子自由擴散的濃度梯度始終保持在*狀態(tài),從而大大提高透析效率,可將透析時間從“天”縮短至“小時”。

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