本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷

大鼠白介素 18（IL-18）ELISA 技術試劑盒使用說明書

技術原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠白介素18（IL-18）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的技術抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠白介素18（IL-18）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘

取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時技術，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預理后的樣本無需稀釋，直接取 10μL 加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱            96 孔配置    48 孔配置      備注

微孔酶標板    12 孔×8 條    12 孔×4 條     無

標準品             0.3mL        0.3mL        無

樣本稀釋液          6mL         3mL         無

技術抗體-HRP        10mL        5mL         無

20×洗滌緩沖液      25mL        15mL      按說明書進行稀釋

底物 A              6mL         3mL          無

底物 B              6mL         3mL          無

終止液              6mL         3mL          無

封板膜              2 張         2 張         無

說明書              1 份         1 份         無

自封袋              1 個         1 個         無

注：標準品濃度依次為：160、80、40、20、10、5  pg/mL.

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步驟

1.  從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的技術抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7.  每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。

結果判斷

 繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。  

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：zui低技術濃度小于 1.0  pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于 15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6 個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。