*步：搖瓶機(jī)復(fù)蘇：根據(jù)所培養(yǎng)的細(xì)菌選擇適宜的培養(yǎng)基，大部分細(xì)菌在LB培養(yǎng)基中在超凈工作臺(tái)先用1毫升左右的適宜的培養(yǎng)基溶解冷凍菌，然后轉(zhuǎn)移到10毫升中試管（放入4毫升液體培養(yǎng)基）中，一般在37攝氏度搖床靜止或低轉(zhuǎn)速培養(yǎng)12小時(shí)或者過葉（溫度取決于所培養(yǎng)的細(xì)菌適宜生長的溫度）。 

在進(jìn)行搖瓶機(jī)試驗(yàn)前，首先檢查搖瓶機(jī)各部件，檢查氣源、電源、管路、壓力表、密封等是否正常，特別強(qiáng)調(diào)的是搖瓶機(jī)做為精度，高科技的儀器，搖瓶機(jī)每個(gè)過程都由的程序控制，所以要求實(shí)驗(yàn)人員在操作前必須對(duì)搖瓶機(jī)的各個(gè)按鈕，流程熟練掌握，詳細(xì)閱讀搖瓶機(jī)說明書，及實(shí)驗(yàn)室儀器安全操作規(guī)程。掌握了搖瓶機(jī)的基本操作要領(lǐng)后，逐步按以下步驟進(jìn)行搖瓶機(jī)細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)：

  第二步：搖瓶機(jī)平板劃線培養(yǎng)：在平板（瓊脂+液體培養(yǎng)基）劃線，放37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)6小時(shí)~12小時(shí)，在平板上觀察是否形成了單菌落.

  第三步：搖瓶機(jī)挑單菌落：在超凈臺(tái)中挑選典型單菌落，置入10毫升中試管（內(nèi)有5毫升液體培養(yǎng)基）中，在37攝氏度搖床，轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)培養(yǎng)12小時(shí)或者過葉，肉眼能看到試管渾濁。

  第四步：搖瓶機(jī)按照1：20的比例將中試管中的菌液移到250毫升三角瓶（放入100毫升液體培養(yǎng)基），，培養(yǎng)條件同前。注意：所有的接種操作均需要在層流罩中，培養(yǎng)基應(yīng)無菌。

以上四步，搖瓶機(jī)是一般細(xì)菌培養(yǎng)都會(huì)涉及到的步驟，有些操作人員在實(shí)際搖瓶機(jī)試驗(yàn)過程中有時(shí)會(huì)省略復(fù)蘇這一環(huán)節(jié)，直接拿燒熱的接種環(huán)挑些菌液冰水，在平板上劃線培養(yǎng)，等長出菌落后，選取合適的菌落搖瓶機(jī)培養(yǎng)。另外，要提醒大家的是：（1）搖瓶機(jī)是搖轉(zhuǎn)方式進(jìn)行混合攪拌，而發(fā)酵罐是直接機(jī)械攪拌;（2）搖瓶機(jī)發(fā)酵罐可以取樣或者儀表時(shí)時(shí)檢測，但是搖瓶機(jī)因?yàn)榱啃〔荒芊奖愕倪M(jìn)行控制和檢測。