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牛奶中己烯雌酚的檢測分析方法

來源:廣州千川儀器科技有限公司   2016年12月03日 15:22  

一、 序言

1.1己烯雌酚是一種人工合成雌激素,主要用于提高奶牛產奶量。近年來,一些商家為促進奶牛生長發(fā)育和產奶量而過度使用該激素,導致乳制品中雌激素的殘留量日益嚴重,而這中激素極有可能增加人類患乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌及前列腺癌等的風險。牛奶制品是人類攝入己烯雌酚的主要途徑,因此,為保障飲用牛奶的健康安全,對其進行相應檢測*。

1.2己烯雌酚(Diethylstilbestrol CAS:50-23-7

二、應用范圍

牛奶、奶粉中己烯雌酚的檢測。

三、實驗條件:

儀器設備:

液相色譜儀,紫外檢測器,SPE固相萃取裝置,渦旋振蕩儀,氮氣吹干儀,真空泵,離心機。

試劑耗材:

濃縮牛奶,己烯雌酚標品,乙腈(色譜純),甲酸、甲醇、氨水、NaOH(均為分析純)。

色譜柱:C18(5 μm,120 Å,4.6×250 mm,)

SPE柱:RNSC603-MAX SPE(500 mg/6 mL 訂貨號:QCRNSC603

四、樣品制備

4.1樣品提取

準確量取5 mL牛奶于50 mL離心管中,加入10 mL乙腈,渦旋振蕩3 min, 3500 r/min離心10 min,取上清液,向殘渣中再加5 mL乙腈,同前操作,合并提取液,50℃氮吹至近干,加10 mL蒸餾水,用1 mol/L NaOH調pH至11.0,9000 r/min離心5 min,上清液待凈化。

4.2 SPE柱凈化

(1)活化:依次用5 mL甲醇,5 mL水活化固相萃取柱。

(2)上樣:將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中,以1 mL/min的流速過柱,收集流出液。

(3)淋洗:依次用1 mL氨水-水(1:19,v/v),0.5 mL甲醇以3 mL/min的流速淋洗,棄去淋洗液。

(4)洗脫:用4 mL甲酸-甲醇(1:19,v/v)以1 mL/min的流速洗脫,收集洗脫液。

(5)重新溶解:洗脫液于40℃氮吹吹干,加1 mL流動相,渦旋30 S溶解,用0.45μm濾膜過濾,供HPLC測定。

五、分析檢測

液相色譜條件

色 譜 柱:C18(250 * 4.6 mm,5 μm)

檢 測 器:UV2996型紫外/可見光檢測器

檢測波長:UV 245 nm                

流 動 相:0.1%甲酸水/甲醇=30/70         

流    速:1.0 mL/min

柱    溫:25 ℃                 

進 樣 量:20 μL

六、結論

上述方法進行固相萃取和液相色譜檢測牛奶中的己烯雌酚,添加回收率達97.41%,表明使用RNSC603-MAX SPE固相萃取柱及C18柱,可快速可靠地檢測乳制品中己烯雌酚。

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