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傳代細胞培養(yǎng)

來源:蒂科(上海)生物科技有限公司   2017年01月16日 13:28  

什么是傳代細胞培養(yǎng)?

原代細胞或細胞株或細胞系需在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的原代細胞或細胞株或細胞系或得到大量的同種細胞,并維持細胞種的延續(xù),這個過程體外培養(yǎng)稱為傳代細胞培養(yǎng)。一般認(rèn)為,細胞培養(yǎng)形成單層匯合,細胞密度與生存空間有密切的關(guān)系,將培養(yǎng)細胞分散,以1:2或l:3或1:4以上的比率轉(zhuǎn)移分散進行培養(yǎng),即為傳代細胞培養(yǎng)。細胞傳代后,一般經(jīng)過三個階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。

常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數(shù)/100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。細胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進行各種試驗。



一、傳代細胞的傳代培養(yǎng)

(1)吸除或倒掉原瓶中的舊培養(yǎng)基(以25mL培養(yǎng)瓶為例)。

(2)每瓶加入2mL,無鈣、鎂PBS,漂洗一次后倒掉。

(3)每瓶加入1mL消化液(0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液),輕輕搖動培養(yǎng)瓶,經(jīng)消化液鋪滿所有細胞表面,待細胞層略有松動,肉眼可觀察到“薄膜”現(xiàn)象時,倒掉消化液,再繼續(xù)作用2~3分鐘,輕輕搖動,細胞層可隨殘留的消化液呈片狀從瓶壁上脫落下來,在顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)細胞回縮變圓,細胞間隙增大,此時應(yīng)立即終止消化。

(4)加入*培養(yǎng)基5mL,用吸管反復(fù)吹打瓶壁上的細胞,吹打時要按順序進行,以確保所有瓶壁均吹打到,吹打時動作要輕柔,不要用力過大,盡可能不要出現(xiàn)泡沫,以避免細胞的機械損傷。

(5)用計數(shù)板計數(shù),計算細胞的濃度,并用培養(yǎng)基調(diào)整適當(dāng)?shù)募毎麧舛群笤俜制颗囵B(yǎng)。

二、傳代細胞的建系和維持

1、細胞檔案

細胞檔案要記錄好,如組織來源、生物學(xué)特性(由形態(tài)、生長繁殖曲線、染色體核型情況、代謝特性、分化特性、病毒敏感性、致瘤特性、有無支原體和潛存病毒等)、培養(yǎng)基的要求、傳代換液時間、擴增時間(分裂指數(shù)),細胞的特殊遺傳標(biāo)志(標(biāo)記染色體)等,這些記錄對于保證細胞的正常生長,保持細胞的一致和經(jīng)長期培養(yǎng)細胞特性的變異比較,都有十分重要的意義。

2、換液傳代

(1)細胞系的傳代、換液方法與前相同,但一般都有自身的規(guī)律性,因而在繼續(xù)傳代時,要注意保持其穩(wěn)定的規(guī)律性,這樣可以減少由于傳代時細胞密度的頻繁增減或換液時間的不規(guī)律而導(dǎo)致細胞生長特性的改變,給以后的實驗帶來影響。

(2)多種細胞系維持傳代,要嚴(yán)格操作程序,對所用的試劑各系不能交叉。每傳5代后,細胞種子均應(yīng)凍存。傳代時均應(yīng)作好記錄,培養(yǎng)瓶上要有明顯標(biāo)記,標(biāo)記細胞系名稱和傳代的代數(shù)及傳代時間。細胞種子的及時凍存不僅可防止污染丟失,而且還可防止因盲目傳代而造成細胞變異,此外還可提供不同代次的細胞同時進行對比試驗。

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T-47D細胞,人乳腺管癌細胞
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GNM 細胞,人上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細胞
T6細胞,人舌癌細胞
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CAL 27細胞,人舌鱗癌細胞
Tca-8113細胞,人舌鱗癌細胞
TSCCa細胞,人舌鱗癌細胞
CRT 細胞,人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞
U251細胞,人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞
SH-SY5Y細胞,人神經(jīng)瘤細胞
BE(2)-M17細胞,人神經(jīng)母瘤細胞
CRL-2268細胞,人神經(jīng)母瘤細胞
IMR-32細胞,人神經(jīng)母瘤細胞
SH-5Y5Y細胞,人神經(jīng)母瘤細胞
SK-N-AS細胞,人神經(jīng)母瘤細胞
SK-N-BE(2)細胞,人神經(jīng)母瘤細胞
SK-N-MC細胞,人神經(jīng)上皮瘤細胞
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SW-13細胞,人腎上腺皮質(zhì)癌細胞
NCI-H295R細胞,人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞
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769-P細胞,人腎腺癌細胞
HuTu-80細胞,人十二脂腸腺癌細胞
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EC9706細胞,人食管癌細胞
Eca-109細胞,人食管癌細胞
KYSE150細胞,人食管癌細胞
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TE-10細胞,人食管癌細胞

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