流式干細胞實驗中熒光染料如何選擇

（1）確定熒光染料本身所適合的流式干細胞儀，需要了解染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長、儀器所配制的檢測濾光片和激發(fā)光源。

（2）了解熒光素的相對熒光強度：相對熒光強度反映的是熒光素-單抗結(jié)合物的亮度，其判斷標(biāo)準(zhǔn)是染色指數(shù)。影響相對熒光強度的因素包括：不同儀器的激光及濾片組合不同，熒光素的相對熒光強度不同；抗體上熒光素分子的多少會影響相對的熒光強度。

（3）選擇原則：考慮抗原的密度【高密度表達的抗原可考慮選擇幾乎所有的熒光素；低密度表達的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素，如PE/APC?！浚蛔园l(fā)熒光【每種干細胞群都有不同水平的自發(fā)熒光，所有的熒光通道均可觀察的自發(fā)熒光，但自發(fā)熒光強度在波長較長時迅速降低。對自發(fā)熒光較強的細胞，選擇發(fā)射波長長的熒光素（APC）可得到較好的S/N比值，對于自發(fā)熒光強度弱的細胞，發(fā)射波長長的熒光素對S/N提高沒有明顯的改善，可選用FITC?！?；非特異性結(jié)合；復(fù)合染料【避免信號衰退。復(fù)合染料因為光、固定劑或溫度升高會導(dǎo)致信號衰退，使復(fù)合染料在上一級染料處發(fā)光。減少樣本暴露于光、高溫或固定劑，可很大程度上避免這一問題。若樣本需要固定，要選擇穩(wěn)定的固定劑，可有效阻止復(fù)合染料的信號衰退。盡量減少信號間的干擾，檢測的顏色越多，面臨的信號干擾越多，選擇試劑時盡可能降低熒光發(fā)射波長間的重疊?！俊?/p>