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培養(yǎng)原代細胞時哪些問題需要注意
1.原代細胞用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質(zhì)量較高，在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入碳酸氫鈉。
2.培養(yǎng)液中應加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細胞狀態(tài)。如果用20%的HEPES，每次配培養(yǎng)液時每200ml培養(yǎng)液可加入5ml.加入HEPES后1640培養(yǎng)液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。
3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度，且不要消化時間太長。也有研究者認為不用胰酶，直接吹打使細胞脫壁，但使用胰酶效果較好。消化時在鏡下觀察到原代細胞形態(tài)稍有變化即可，不要等形態(tài)明顯變化后再停止?？梢圆挥眉友褰K止消化，只要將胰酶倒出來，加上培養(yǎng)液吹打即可。
4.傳代密度不宜過高也不易過低，一般1瓶傳3瓶可能比較合適。
5.培養(yǎng)液應該適當偏酸性，在7.0-7.2之間比較好。一般加上HEPES后，pH值是不用調(diào)的。
6.細胞代數(shù)越高生長越快，同時性狀和原代差別也更大。一般2-3天傳代一次比較合適。
7.傳代時原代細胞密度在80%左右比較好，如果超過90%融合再傳會影響細胞狀態(tài)。
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