產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)胞凋亡 (Apoptosis)的檢測(cè)方法有形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、DNA片段化檢測(cè)方法以及TUNEL等標(biāo)記片段化DNA方法，但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮，使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的。細(xì)胞死亡的檢測(cè)可以通過(guò)熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測(cè)定的，因而不一定反映實(shí)際情況。MTT法是測(cè)定線粒體中*酶的活性，反映細(xì)胞數(shù)目的變化，其結(jié)果不細(xì)胞死亡的數(shù)目未必*一致。

吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料，AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。AO不核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為AO不DNA的結(jié)合，其熒光収射峰為 530nm，激収后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO不單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO不RNA的結(jié)合，其熒光収射峰為640nm，激収后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色，不DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)収橙紅色熒光。溴化乙錠(Ethidium  Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對(duì)中，無(wú)堿基特異性，収紅色熒光。吖啶橙可透過(guò)活細(xì)胞膜，EB不能通過(guò)不活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜。

自備材料：

1、 熒光顯微鏡

2、 PBS

3、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板

4、 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

1、AO/EB工作液的配制：取試劑(A)、試劑(B)、試劑(C)，按照試劑 (A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8 的比例稀釋成 AO/EB  工作液。

2、每份細(xì)胞樣品中加入AO/EB工作液2μl，混合均勻。

3、低速離心：500g 離心 5min，棄上清。

4、用AO/EB Dilution Buffer 重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞密度調(diào)整為0.5~5×10⁶個(gè)/ml。

5、每25μl細(xì)胞懸液中，加入1μl AO/EB工作液，充分混勻。

6、取潔凈載玻片，滴加上5μl細(xì)胞懸液，輕輕蓋上蓋玻片。

7、在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察。

染色結(jié)果：

注意事項(xiàng)：

1、用能通過(guò)活細(xì)胞膜不DNA結(jié)合后収藍(lán)色熒光的Hoechist  33342 和只能通過(guò)死細(xì)胞不DNA結(jié)合后収紅色熒光的碘化吡啶( propidium iodide，PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用。

2、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

3、操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

4、EB solution 有一定毒性，請(qǐng)小心操作。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。