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FLAG標(biāo)記物

來源:上海源葉生物科技有限公司   2010年11月24日 09:27  

序列
AspTyrLysAspAspAspAspLys( D  Y  K  D  D  D  D  K)
抗體
鼠源單抗MI和M2
供應(yīng)商
Sigma-Aldrich,其他供應(yīng)商
商品化試劑
在E.coli和酵母表達(dá)系統(tǒng)的氨基末端和羧基末端標(biāo)記載體
純化和標(biāo)記的抗體以及親和樹脂純化多肽
非商品化試劑
在E.eoli,酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)的多種載體

 
    FLAG標(biāo)記物是惟一專為標(biāo)記目的設(shè)計(jì)的多肽標(biāo)記物(Hoppetal.1988),其特點(diǎn)是標(biāo)記物的序列不是來自任何已知的蛋白。該標(biāo)記物是由8個氨基酸殘基組成的多肽,具有親水性,可置于蛋白的氨基或羧基末端。有兩種商品化的抗體MI和M2,可識別FLAG標(biāo)記物。Mi抗體的結(jié)合要求表位是氨基末端,因而僅適用于將標(biāo)記物連接到蛋白的氨基末端。二價(jià)陽離子(為Ca2+)可增強(qiáng)MI抗體與FLAG標(biāo)記物的結(jié)合,因此金屬螯合劑,如EDTA可引起其相互作用*或部分破壞,可在很溫和的條件下純化。
 
    M2抗體的存在使該系統(tǒng)顯示出更大的應(yīng)用價(jià)值,因?yàn)镕LAG無論是處于蛋白分子中間或羧基末端,該抗體可識別相同的FLAG表位。M2對FLAG表位的識別不需要二價(jià)陽離子的存在,并且可以通過游離的多肽競爭性地將FLAG標(biāo)記蛋白從M2分子中溫和洗脫下來。
 
    多種FLAG標(biāo)記蛋白可保留全部的生化活性(如轉(zhuǎn)錄因子、生長因子和酶),這些標(biāo)記物亦廣泛應(yīng)用于細(xì)胞染色、免疫印跡和免疫沉淀試驗(yàn)中。由于已有各種載體和檢測試劑出售,包括抗體親和樹脂和直接標(biāo)記抗體的商品,使其成為人們常選用的系統(tǒng)。
 
    由于對抗-FLAG抗體的特異性進(jìn)行了更詳盡的研究,使得可以采用其他替代序列(Slootstraetal.1997)和更短部分(Knappik和Pluckthunl994)作為標(biāo)記物???FLAG抗體產(chǎn)生的本底一般非常低,但M2抗體至少可與一種細(xì)胞蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)(Schafer和Braunl995)。

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