手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
[器材和試劑]
●電感受態(tài)大腸桿菌TG1（
●37℃孵育箱（NewBrunswick）
●電轉(zhuǎn)化儀及0．2cm間距小杯（GenePulserTM Biorad）
●16℃水浴
●SOC培養(yǎng)基（將20g細菌培養(yǎng)用胰蛋白胨、5g酵母提取物及0．5g NaCl溶于950ml水中。加入10m1 250mmol/L
KCl，5mol/L NaOH調(diào)整pH至7．0并加入去離子水至IL。高壓滅菌。手感變涼后，再加入5ml 2mol/L MgCl2
和20ml lmol/L葡萄糖）
●100mm和150mm含100ug/m1氨芐青霉素和2%葡萄糖的TYE平板（TYE/amp/glu）（將16g細菌培養(yǎng)用胰蛋白胨、10g酵母提取物、5g NaCl和15g細菌培養(yǎng)用瓊脂加入到去離子水中并調(diào)整體積至IL。高壓滅菌。當溶液乎感變涼時，加入氨芐青霉素和葡萄糖并倒板）
●含100ug/ml氨芐青霉素和2%葡萄糖的2×TY培養(yǎng)基（2×TY/amp/glu）
●50%甘油
[方法]
1．將電轉(zhuǎn)化儀設置為200D（電阻）、25rtF（電容）和2．5kV。
2．在冰上復溶電感受態(tài)細菌或使用新鮮制備的電感受態(tài)細胞。將電轉(zhuǎn)化杯、杯固定夾、細胞和DNA均放于冰上。
3．將80ng已純化且無鹽的DNA與50g1細菌混合。冰上孵育混合物1分鐘。
4．將混合物轉(zhuǎn)移至0．2cm間距的電轉(zhuǎn)化杯中，小心操作切勿在電極間留氣泡。輕拍小杯，使所有液體均沉淀于瓶底。迅速轉(zhuǎn)移以使小杯處于低溫狀態(tài)。
5．將透明杯放入電轉(zhuǎn)化儀內(nèi)，確保小杯側(cè)面干燥（以免電?。?。啟動脈沖，立即加入1．0ml SOC培養(yǎng)基并混合。時間恒定值應在4．5～5．5毫秒范圍之間。如果時間恒定值小于4．3秒，則重復DNA沉淀。
6．在每次電轉(zhuǎn)化后的細菌中加入lmlSOC培養(yǎng)基，以250r/min振蕩培養(yǎng)，37℃1小時。
7．合并所有電轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液，系列稀釋后在100mm TYE/amp/glu平板上鋪板確定文庫容量。
8．以200g、4℃10分鐘離心剩余的細菌培養(yǎng)液。將每4次電轉(zhuǎn)化的沉淀重懸于500u1的體積。以每份125ul等量體積分別鋪于150mmTYE/amp/glu平板上或?qū)?00ul鋪于含TYE/amp/glu的Nunclon quare ishes500cm2。將這些平板在30℃下培養(yǎng)過夜。
9．加入10m1含15%甘油（0．2gm濾膜過濾除菌）的TYE/amp/glu培養(yǎng)基；刮取平板上的細菌。在-70℃下儲存抗體文庫
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心