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重視VELP凱氏定氮儀的操作方法及維護(hù)

來源:德祥科技有限公司   2017年03月23日 17:13  
   VELP凱氏定氮儀是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的儀器。因其蛋白質(zhì)含量測量計算的方法叫做凱氏定氮法,故被稱為凱氏定氮儀。

  VELP凱氏定氮儀主要作用是用于生化試驗(yàn)中。它的工作是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的計算。

  VELP凱氏定氮儀的操作方法

  一、消化

  根據(jù)樣品量的多少選擇適宜的凱氏燒瓶4個(此處以50毫升為例),其中2個為對照。向燒瓶內(nèi)加入準(zhǔn)確稱量的樣品,注意要把樣品加至燒瓶底部,切勿沾在瓶口及瓶頸上。另外2個作空白對照,好對樣品進(jìn)行校正。

  在每個燒瓶中加入約300毫克硫酸鉀-硫酸銅混合物(硫酸鉀:五水硫酸銅=3:1、6:1或10:1均可),再用量筒加入3毫升濃硫酸。將上述4個凱氏燒瓶放在通風(fēng)良好處(在通風(fēng)櫥中進(jìn)行)加熱消化。先用小火加熱至沸騰。此時會產(chǎn)生大量泡沫,應(yīng)特別注意不能讓黑色物質(zhì)上升到燒瓶頸部,否則將嚴(yán)重影響分析結(jié)果。當(dāng)混合物停止冒泡,蒸汽與二氧化硫也均勻地放出時,將火焰調(diào)節(jié)到保持瓶內(nèi)液體微微沸騰。假若發(fā)現(xiàn)瓶頸上有黑色顆粒,應(yīng)小心地將燒瓶傾斜振搖,用消化液將其洗下。

  在消化過程中要時常轉(zhuǎn)動燒瓶,使全部樣品都浸在消化液中。當(dāng)消化液呈清澈淡藍(lán)色時即告消化結(jié)束。時間一般在5~6小時!若樣品中含賴氨酸或組氨酸較多時,消化時間需要延長1~2倍。因?yàn)檫@兩種氨基酸中的氮在短時間內(nèi)不易消化*。

  二、蒸餾

  洗滌蒸餾儀:用硼酸指示劑(取100毫升2%硼酸溶液,滴加混合指示劑約1毫升,搖勻后呈紫紅色即可;混合指示劑:50毫升0.1%甲烯藍(lán)乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇,存于棕色瓶中)檢測是否清洗干凈。干凈標(biāo)準(zhǔn):指示劑不變色。

  樣品和空白的蒸餾:取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應(yīng)室,關(guān)閉加樣口,另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端。取30%氫氧化鈉(W/W)溶液約10毫升,從加樣口緩慢加入,當(dāng)未加完時關(guān)閉,并加入約3毫升蒸餾水,再繼續(xù)緩慢加入一半后關(guān)閉,讓剩下的水作液封。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱(注:在清洗儀器完畢后應(yīng)拿走加熱器),待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始計時,蒸餾5分鐘,然后移動三角瓶使液面離開冷凝管口約1厘米,并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周,繼續(xù)蒸餾1分鐘??瞻淄瑯?。

  清洗儀器,同上,不*指示劑。

  三、滴定

  用0.0100mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸(要標(biāo)定,費(fèi)時)滴定三角瓶中收集的氨,直至硼酸指示劑由綠變紫紅。

  VELP凱氏定氮儀的維護(hù)方法

  1、定期清洗VELP凱氏定氮儀,對排廢裝置進(jìn)行清洗,長時間不清洗,會堵塞管路。量取25ml醋酸溶液和5ml水,采用手動蒸餾半小時,揮發(fā)的醋酸將清除排廢裝置內(nèi)壁上殘留的堿液。

  2、維修當(dāng)排廢裝置堵塞后,一般為廢液缸下方的電磁閥內(nèi)被炭化的顆粒堵塞。關(guān)閉儀器電源開關(guān),打開儀器后蓋,取下電磁閥,拆開后清除內(nèi)部廢渣后并安裝。

  3、在每次更換完標(biāo)準(zhǔn)滴定酸或接收液后,以及對儀器進(jìn)行維修后,都要對VELP凱氏定氮儀進(jìn)行回收率的測定。一般采用硫酸銨進(jìn)行回收率分析,保證回收率在99.5%-100.5%的范圍之內(nèi),說明VELP凱氏定氮儀正常,可以進(jìn)行樣品測定。

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