中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)定量檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介

來(lái)源：愛必信（上海）生物科技有限公司 2017年03月30日 16:54

中性粒細(xì)胞（PMNs）的吞噬作用在抵御細(xì)菌、真菌等病原微生物感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用。吞噬作用過(guò)程包括幾個(gè)主要階段：趨化，黏附，內(nèi)吞，胞內(nèi)氧依賴性（呼吸爆發(fā)）和氧非依賴性的殺傷。正常條件下細(xì)菌感染后，機(jī)體PMNs被激活，PMNs吞噬和氧化功能增強(qiáng)是機(jī)體重要的天然免疫防御機(jī)制。因此通過(guò)觀察PMNs的活化狀態(tài)可以幫助了解機(jī)體細(xì)菌感染的狀況。

愛必信（Absin）提供的試劑盒采用流式細(xì)胞儀（FMC）檢測(cè)PMNs功能，用PMA作為刺激劑，以二氫若丹明作為熒光底物。中性粒細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生反應(yīng)性氧化物，氧化二氫若丹明為可發(fā)出熒光的若丹明123。這個(gè)反應(yīng)可以由溶血素終止。產(chǎn)生的反應(yīng)性氧化物可以用熒光強(qiáng)度來(lái)表示。PMNs活化和機(jī)體的天然免疫能力。可用于研究在各種病理情況下如感染、自身免疫疾病、應(yīng)急、腫瘤、手術(shù)等中中性粒細(xì)胞的功能改變及藥物的效果評(píng)價(jià)。該試劑盒不僅用于人，還可以用于小鼠、大鼠、兔、狗、牛等其他種屬。

操作步驟：

1. 無(wú)菌肝素抗凝的全血50ul，加刺激劑（如PMA）50ul, 37°C 孵育15分鐘。

2．加二氫若丹明25ul, 37°C避光孵育5分鐘

3．溶血素用無(wú)菌去離子水1：10稀釋，加稀釋后的溶血素1ml ，室溫避光溶血15分鐘

4．PBS洗滌2次,1500rpm離心5分鐘，去上清液

5．加0.5mlPBS重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例圖：

圖1前向角、側(cè)向角點(diǎn)狀圖譜圖2 靜止、活化中性粒細(xì)胞FL1熒光柱狀圖譜

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