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制備單克隆抗體的方法

來源:上海谷研實業(yè)有限公司   2017年04月27日 13:56  

干細胞制備單克隆抗體的方法是用缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤細胞變異株與脾臟的B細胞融合。采用HAT選擇性培養(yǎng)基(培養(yǎng)基中加次黃嘌呤HyPoxanthine H,氨基喋呤Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T),在這種選擇性培養(yǎng)基中,由于變異的瘤細胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶或胸腺嘧啶核苷激酶,所以不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。而只能利用谷酰胺與尿核苷酸單磷酸合成DNA,這一途徑又被氨基喋呤所阻斷,所以未融合的瘤細胞不可避免也要死亡。融合的雜交瘤細胞由于脾淋巴干細胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶,可以通過次黃嘌呤合成DNA,克服氨基喋呤的阻斷,因此雜交瘤細胞大量繁殖而被篩選出來。B淋巴細胞在一般培養(yǎng)基中不能長期生長,一般于二周內均死亡。 
單克隆抗體與常規(guī)抗體相比有如下優(yōu)點:①單一特異性,與一個抗原決定簇反應;② 可重復性,能夠提供*一樣的抗體制劑;③一經制出,可無*地供應;④單克隆抗體,不一定需要純的抗原;⑤能查出混合物中存在的用常規(guī)方法查不出的少量成分干細胞。 

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