微生物菌種常規(guī)宏觀菌落形態(tài)學(xué)觀察,主要觀察菌落在其適合的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況:細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)形態(tài)、大小、顏色是否均勻一致,菌落個(gè)體表面及邊緣的生長(zhǎng)狀況;在液體培養(yǎng)基上的渾濁狀況、沉淀狀況、液面菌膜狀況;半固體上穿刺接種后,觀察細(xì)菌是否沿著接種線生長(zhǎng)以及其生長(zhǎng)狀態(tài)是呈毛刷樣生長(zhǎng)還是均勻生長(zhǎng),上下生長(zhǎng)是否一致.在鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng),觀察結(jié)果是否跟預(yù)期結(jié)果相同.
細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)學(xué)觀察,即通過顯微鏡觀察.觀察前細(xì)菌需要著色,要根據(jù)預(yù)先確定的觀察項(xiàng)目選擇與之相對(duì)應(yīng)的染色方法,目前常用的染色方法包括革蘭氏染色法、美藍(lán)染色法、Ziehl—Neelsen染色法、姬姆薩染色法、鞭毛染色法、芽胞染色法等.盡量挑選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌進(jìn)行染色觀察,此時(shí)的細(xì)菌生長(zhǎng)處于幼期,利于觀察,因?yàn)橐恍╆惻f細(xì)菌的染色結(jié)果會(huì)有變化,如本為革蘭氏陽性菌經(jīng)過長(zhǎng)期擱置后染色結(jié)果可能為革蘭氏陰性.同時(shí)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)要注意培養(yǎng)基的挑選,一些細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)如莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞等,其表達(dá)是需要在特定的培養(yǎng)基上才能正常發(fā)育,有的細(xì)菌如炭疽在一般的培養(yǎng)基上不形成莢膜,只在動(dòng)物體內(nèi)形成明顯的莢膜,所以需先接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后用病料進(jìn)行涂片鏡檢.在鏡檢時(shí)觀察細(xì)菌基本形態(tài)結(jié)構(gòu)和大小及其排列狀態(tài)、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等.
微生物菌種形態(tài)學(xué)鑒定輔以生化試驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中具有重要的意義,生化試驗(yàn)是根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)過程中不同菌種所產(chǎn)生的新陳代謝產(chǎn)物各異,表現(xiàn)出不同的生長(zhǎng)特性.通過生物化學(xué)的方法來檢測(cè)這些物質(zhì)的存在與否,從而能夠得到細(xì)菌的鑒定結(jié)果.如糖(醇)類代謝試驗(yàn)、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、有機(jī)酸鹽和胺鹽利用試驗(yàn)、呼吸酶類試驗(yàn)、毒性酶類試驗(yàn)等.
血清型鑒定是根據(jù)細(xì)菌具有相對(duì)特異性的抗原結(jié)構(gòu)這個(gè)特點(diǎn)進(jìn)行微生物鑒定的特異方法.抗原的特異性程度又存在于屬間細(xì)菌所共有的共同抗原,這種抗原的存在,能表明其屬性.另一類特異性抗原只存在于特定的種、型,是確定細(xì)菌種、型的重要依據(jù).通過專門的分型血清即可對(duì)這些細(xì)菌的血清型進(jìn)行鑒定.
細(xì)菌毒力的測(cè)定,病原菌侵入機(jī)體能否引起疾病與其本身的毒力、侵入機(jī)體的數(shù)量和侵入部位有關(guān).不同的病原菌或同種細(xì)菌不同的型或株,毒力常不一致.常用LD50或ID50表示毒力,即在一定時(shí)間內(nèi),能使一定條件的某種動(dòng)物半數(shù)死亡或感染需要的zui小細(xì)菌數(shù)或毒素量.毒力測(cè)定在微生物菌種鑒定過程中可用于鑒別一些有代表性的菌株.LD50可用Reed—Muench公式進(jìn)行計(jì)算.