原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。
一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因： 
●胰蛋白酶消化過度 
●支原體污染 
●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）               
●細(xì)胞老化 
●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 
解決方法： 
●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 
●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 
●啟用新的保種細(xì)胞 
●調(diào)節(jié)*接種細(xì)胞濃度
二、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因： 
●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子； 
●支原體污染； 
●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解； 
●DNA污染 
解決方法： 
●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液； 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體； 
●用DNaseI處理細(xì)胞
三、培養(yǎng)原代細(xì)胞生長緩慢
可能原因：
●由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 
●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； 
●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； 
●試劑保存不當(dāng)； 
●接種細(xì)胞起始濃度太低； 
●細(xì)胞已老化； 
●支原體污染 
解決方法： 
●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 
●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；
●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；
●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；
●增加接種細(xì)胞起始濃度； 
●換用新的保種細(xì)胞； 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
可能原因：
●細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；
細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；
細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；
胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。
●污染
支原體污染
霉菌污染
●培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證
選擇的培養(yǎng)基是否合適
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤
●原代細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確