以毛細(xì)管轉(zhuǎn)移方式進(jìn)行北方轉(zhuǎn)印實(shí)驗(yàn)
要進(jìn)行北方雜合反應(yīng)前,必須先將RNA自洋菜膠體轉(zhuǎn)移至硝化纖維紙(nitrocellulose membrane) 或尼龍膜 (nylon membrane) 上,這一個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法 (capillary transfer)、真空轉(zhuǎn)移法 (vacuum transfer) 與電轉(zhuǎn)印法 (electroblotting)。 毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法借助吸水紙吸收轉(zhuǎn)移緩沖液時(shí)所產(chǎn)生的牽引力量將RNA自洋菜膠體轉(zhuǎn)移至膜上;要轉(zhuǎn)印*,起碼需要作用6 h以上。 雖然所需花費(fèi)的時(shí)間比較長,以其不須要特別的儀器設(shè)備,毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA時(shí)采用變性聚丙烯酰胺膠體電泳,則必須以電轉(zhuǎn)印法進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)印。至于膜的選擇,硝基纖維素膜的優(yōu)點(diǎn)是比較不會(huì)產(chǎn)生非專一性反應(yīng);不過其一旦被潤濕再烘干的后,容易碎裂,不適用于進(jìn)行多次雜合反應(yīng)。 尼龍膜的優(yōu)點(diǎn)是韌性好,與核酸結(jié)合的能力也相當(dāng)強(qiáng),正可以彌補(bǔ)硝基纖維素膜的缺點(diǎn),現(xiàn)已成為主流。 一旦將RNA轉(zhuǎn)移至膜上后,即可以利用紫外線照射法 (uv irradiation) 或真空干燥法 (在真空下80℃加熱2 h) 將其固定于轉(zhuǎn)印膜上。
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