細胞分裂指數(shù)操作說明書

來源：上海谷研實業(yè)有限公司 2017年06月29日 14:35

【實驗用品】

材料：貼壁培養(yǎng)的ATCC細胞

器材：離心機、顯微鏡、血細胞計數(shù)板

試劑：Hanks液、0．25％胰蛋白酶、含10％小牛血清／胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(根據(jù)實驗需要也可以是其他種類的培養(yǎng)基)

【實驗步驟】

(1)用胰蛋白酶消化處于對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)細胞，細胞置于10ml離心管中，1000r／min離心5min，棄上清。

(2)加入含血清的DMEM培養(yǎng)基，制備單細胞懸液。

(3)吹打均勻后，對ATCC細胞進行計數(shù)。

(4)按2x104～5x104／ml的密度將細胞接種到24孔細胞培養(yǎng)板中。

(5)每天用胰蛋白酶對其中3孔細胞進行消化，并進行計數(shù)；

(6)同時平行取3孔用95％酒精固定，吉姆薩或HE染色，選擇細胞密度適中的區(qū)域觀察分裂相細胞，至少選擇3個視野，每個視野計數(shù)1000個細胞，計算出每1000個細胞中的處于分裂相細胞的平均數(shù)值進而得出分裂相所占百分比。

(7)以培養(yǎng)時間作為橫坐標，分別以細胞分裂相百分比(左側(cè))與每孔測得的平均細胞數(shù)(右側(cè))作為縱坐標繪制曲線。

【結(jié)果分析】

將細胞分裂指數(shù)與細胞生長曲線融合在一起可以清晰地觀察到ATCC細胞增殖的趨勢與增殖zui旺盛的時段。

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