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細(xì)胞分裂指數(shù)操作說明書

來源:上海谷研實業(yè)有限公司   2017年06月29日 14:35  

【實驗用品】

材料:貼壁培養(yǎng)的ATCC細(xì)胞

器材:離心機(jī)、顯微鏡、血細(xì)胞計數(shù)板

試劑:Hanks液、0.25%胰蛋白酶、含10%小牛血清/胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(根據(jù)實驗需要也可以是其他種類的培養(yǎng)基)

【實驗步驟】

(1)用胰蛋白酶消化處于對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞置于10ml離心管中,1000r/min離心5min,棄上清。

(2)加入含血清的DMEM培養(yǎng)基,制備單細(xì)胞懸液。

(3)吹打均勻后,對ATCC細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。

(4)按2x104~5x104/ml的密度將細(xì)胞接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。

(5)每天用胰蛋白酶對其中3孔細(xì)胞進(jìn)行消化,并進(jìn)行計數(shù);

(6)同時平行取3孔用95%酒精固定,吉姆薩或HE染色,選擇細(xì)胞密度適中的區(qū)域觀察分裂相細(xì)胞,至少選擇3個視野,每個視野計數(shù)1000個細(xì)胞,計算出每1000個細(xì)胞中的處于分裂相細(xì)胞的平均數(shù)值進(jìn)而得出分裂相所占百分比。

(7)以培養(yǎng)時間作為橫坐標(biāo),分別以細(xì)胞分裂相百分比(左側(cè))與每孔測得的平均細(xì)胞數(shù)(右側(cè))作為縱坐標(biāo)繪制曲線。

【結(jié)果分析】

將細(xì)胞分裂指數(shù)與細(xì)胞生長曲線融合在一起可以清晰地觀察到ATCC細(xì)胞增殖的趨勢與增殖zui旺盛的時段。

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