蛋白質(zhì)純化離子交換法

來源：上海源葉生物科技有限公司 2011年01月04日 09:00

各種蛋白質(zhì)分子上可能帶有不同的電性，經(jīng)過離子交換管柱，可依其分子帶電性的差異而分離開來（Pharmacia 操作手冊, Ion Exchange）。

儀器設(shè)備：

塑料管柱（Bio-Rad Econo-Pac column 732-1010, 1.5×12 cm）

分劃收集器（fraction collector, 另需準(zhǔn)備干凈試管約60 支）

濃縮用離心機(jī) （低速5,000 rpm）及濃縮離心管Centriplus

藥品試劑：

DEAE Sephacel （膠體體積約15 mL，預(yù)先以緩沖液Buffer A-0 平衡好）

Buffer A-0 （如上述配法）

Buffer A-300 溶離液：Buffer A-0 加有0.3 M NaCl

Buffer A-500 溶離液：Buffer A-0 加有0.5 M NaCl

方法步驟：

1）將Econo-Pac 管柱架好，并將三向閥及軟管等組合完成。

2）震蕩DEAE Sephacel 膠體使的懸浮，小心倒入管柱中，讓膠體慢慢沈降，在沈降過程中隨時加入buffer A-0，勿使膠體干掉。

3）待膠體沈降*后，高度應(yīng)在15 cm 左右。膠柱以buffer A-0 一直流洗，流速快慢可以不考慮；連接好收集器，每試管收2.5 mL。離子交換法的膠體平衡極為重要，可測流出液的pH 或離子濃度，看是否與buffer A-0 相同，若不一樣則需要再流洗的。

4）樣本的添加方法同上述膠體過濾法，并啟動分劃收集器開始收集，當(dāng)樣本全部沒入膠體后，再加入同體積buffer A-0。以buffer A-0 流洗50 mL 后，去除膠體上方的緩沖液，但勿使膠體干掉。

5）然后依序以buffer A-300, buffer A-500 溶離的，每批次流洗各50 mL，注意更換濃度時，膠體上方勿殘存上一種溶液。

6）收集所有分劃，進(jìn)行蛋白質(zhì)定量分析以及GUS 活性測定，結(jié)果作圖。

7）收集GUS 活性區(qū)，并以Centriprep-30 濃縮至 _______ mL （IEX），記得要保留100 μL。

8）離子交換膠體以buffer A-0 洗過50 mL 后，收起來交回。

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