国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>技術(shù)參數(shù)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線(xiàn)咨詢(xún)

細(xì)胞死亡的檢驗(yàn)方式

來(lái)源:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司   2017年07月04日 14:31  

ATCC細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)具有固有的形態(tài)特征,如細(xì)胞核表現(xiàn)縮小、染色質(zhì)邊緣化、凝集,凋亡晚期還會(huì)出現(xiàn)由核碎片與胞質(zhì)內(nèi)的部分細(xì)胞器混合在一起,且被細(xì)胞膜包裹形成的凋亡小體。
DNA特異性染料(如Hoechst33342、Hoechst33258和DAPI等)可以與DNA的A-T堿基區(qū)進(jìn)行非嵌入式結(jié)合,從而使細(xì)胞核著色,在紫外光激發(fā)時(shí)會(huì)出現(xiàn)明顯的熒光。通過(guò)熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡可以觀察細(xì)胞染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)變化、膜結(jié)構(gòu)及通透性的改變,從而鑒別凋亡細(xì)胞、正常細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果直觀,至今仍是判定細(xì)胞是否發(fā)生凋亡的金標(biāo)準(zhǔn),但觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征耗時(shí)費(fèi)力,不適于大量凋亡樣本的檢測(cè)。
細(xì)胞凋亡的DNA化檢測(cè)
DNAladder
提取凋亡細(xì)胞的基因組DNA,經(jīng)電泳后染色觀察可見(jiàn)180bp~200bp及其不同倍數(shù)的彌散狀DNA條帶,即DNAladder。DNAladder被視為經(jīng)典的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的指標(biāo),但DNA凝膠電泳特異性雖高而靈敏度偏低,不適于檢測(cè)ATCC細(xì)胞凋亡初期DNA鏈的輕微損傷。
TUNEL檢測(cè)法
TUNEL法是一種將分子生物學(xué)和免疫組織化學(xué)相結(jié)合的原位檢測(cè)凋亡細(xì)胞DNA的方法。
其基本原理為:細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)核酸內(nèi)切酶被激活,染色質(zhì)或DNA被核酸內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生180bp~200bp的含3′-OH末端的片斷,脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將結(jié)合有熒光素的核苷酸(dUTP)標(biāo)記到缺口3′-OH的末端,依次加入HRP抗熒光素抗體和HRP顯色底物DAB,凋亡細(xì)胞顯色明顯,而正常細(xì)胞沒(méi)有DNA斷裂或者只有少量的DNA發(fā)生斷裂,故不被顯色。
TUNEL法因其靈敏高而被廣泛用于各種凋亡細(xì)胞的檢測(cè),由于在壞死細(xì)胞內(nèi)也可能存在DNA,所以只有DNA鏈普遍斷裂才能證明細(xì)胞發(fā)生凋亡。另外,在TUNEL法具體試驗(yàn)操作過(guò)程中,需要摸索細(xì)胞的固定及消化時(shí)間,以提高該技術(shù)的敏感性和獲得較低的背景值。
ELISA檢測(cè)法
應(yīng)用ELISA方法也可以檢測(cè)DNA,在凋亡的早期DNA發(fā)生斷裂,核小體釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中,核小體是染色質(zhì)的基本單元,通過(guò)ELISA檢測(cè)凋亡細(xì)胞釋放到細(xì)胞質(zhì)中的核小體從而確定細(xì)胞凋亡程度。
此方法既可定性又可以定量,而且適合檢測(cè)大批量樣本,不需要特殊的儀器。試驗(yàn)過(guò)程中如果裂解細(xì)胞的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致細(xì)胞核中的DNA片段也被計(jì)算在內(nèi),進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果偏高,因此不同的ATCC細(xì)胞系需要經(jīng)過(guò)數(shù)次摸索才能確定*檢測(cè)條件。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢(xún)客服 : 0571-87858618
会理县| 霞浦县| 方正县| 临清市| 衡东县| 武鸣县| 平阳县| 宝鸡市| 高青县| 伊宁市| 井冈山市| 宁阳县| 寿宁县| 玛沁县| 宜昌市| 会泽县| 武清区| 大田县| 大足县| 水富县| 怀宁县| 泌阳县| 陆川县| 长顺县| 若羌县| 图木舒克市| 伊金霍洛旗| 泸溪县| 丘北县| 邵东县| 九江县| 专栏| 湟源县| 乌恰县| 兴义市| 南安市| 图木舒克市| 沧州市| 获嘉县| 和政县| 鄂托克旗|