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液相色譜儀作為一種分離技術(shù)和方法，目前已經(jīng)發(fā)展到一個全新的階段。高精度的輸液泵，應用廣泛的色譜分離柱，低噪音、高靈敏度的各種檢測器和功能強大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn)，都推動了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應用廣泛的優(yōu)點倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領(lǐng)域。
應用HPLC技術(shù)在血藥濃度、生物胺、核苷酸、蛋白質(zhì)濃度測定等實際工作中，積累了許多的方法和經(jīng)驗，在這里與大家交流，希望能對同行們有所幫助和借鑒，共同促進液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展。
液相色譜儀使用過程中常見問題分析
（一）柱壓問題
柱壓過高，導致這種情況的直接原因可能是色譜分離柱或進樣器流動不暢通。出現(xiàn)這種情況的根本原因可能是流動相抽濾不干凈，存有雜質(zhì)，從而堆積在色譜柱或過濾器中，這時只要重新配置一遍流動相。解決“堵”的方法就是檢查色譜分離柱，確定其流動是否暢通，具體操作是在泵工作的情況下將色譜柱的出口處擰開，看看是否有流動相流出，同時可以調(diào)節(jié)流速，觀察流動相流出的流量，進而判斷色譜柱是否堵了。還有一些原因，比如：流動相的流速過大（一般為1.0ml/min）、流動相的成分不符合標準（沒有使用HPLC級別的試劑或者沒有超聲*）等。這些按照藥典調(diào)整成正確的設(shè)置即可。如果懷疑是在線過濾器堵了可以關(guān)閉排液閥，斷開出口管路，設(shè)定流速為1ml/min，如壓力>3kgf/cm2，則可能堵塞，可以考慮將其置于5%稀硝酸，超聲波清洗一段時間。zui后在檢測驗樣品的時候加一個保護柱。有時候也會柱壓過低，發(fā)生這個原因主要是連接不牢固，導致漏液，擰緊即可。更換流動相時沒有進行脫氣，導致儀器里面進入空氣，一般的解決方法就是卸下超聲清洗，然后進行脫氣。
（二）基線漂移
在色譜儀啟動之前，通常先啟動半個小時后再進行操作，這樣做是避免基線漂移。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因很多，其一是色譜柱溫差變化大，需要控制柱溫，用色譜純，也可多抽濾幾次，除去醇溶性流動相外的其他流動相要勤更換，做到現(xiàn)配現(xiàn)用，以免滋生微生物，堵塞進樣通道，造成基線不穩(wěn)定，影響出峰。第三個原因是流路本身長期進樣沒有時間保養(yǎng)積淀的雜質(zhì)。解決方法是用洗脫劑沖洗樣品流動的通道，對于反相色譜系統(tǒng)的流動相甲醇-水系統(tǒng)，按照梯度洗脫的方法沖洗掉系統(tǒng)和色譜柱中的雜質(zhì)，以免影響樣品的質(zhì)量。必要時可以用異丙醇。第四個可能性就是由于紫外燈的使用壽命到了，不能再繼續(xù)工作，解決方法是換紫外燈。zui后是樣品本身性質(zhì)的影響，對于流動相的影響較大，解決方法就是用保護柱檢測樣品，以免出現(xiàn)問題。
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