間接法是技術(shù)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以技術(shù)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:
一、將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
二、加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)
合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過(guò)程中被洗去。
三、加酶標(biāo)抗抗體??捎妹笜?biāo)抗人 Ig 以技術(shù)總抗體,但一般多用酶標(biāo)抗人 IgG 技術(shù) IgG 抗
體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載
體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。
四、加底物顯色
本法主要用于對(duì)病原體抗體的技術(shù)而進(jìn)行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立技術(shù)相應(yīng)抗體的方法。
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