免疫濁度技術(shù)是利用可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合,形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物,使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)反應(yīng)液中保持抗體過剩時,形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加,反應(yīng)液的濁度亦隨之增加,與一系列的標(biāo)準(zhǔn)品對照,即可計(jì)算出樣品的含量。
免疫濁度分析的光學(xué)基礎(chǔ)是反應(yīng)液中分散粒子對光的反射、折射、散射(衍射)和吸收等。粒子被光照射后而發(fā)光,這一現(xiàn)象主要取決于粒子的大小、入射光波長及粒徑與波長的比例關(guān)系等等。當(dāng)入射光作用于粒子后向各個方向發(fā)射光,甚至可繞過粒子發(fā)射光線,稱散射或衍射光。但光照射到膠體溶液后,粒子的光學(xué)現(xiàn)象是復(fù)雜的,濁度法中檢測的光信號成分主要為散射光或透射光。
免疫濁度測定技術(shù)按照儀器設(shè)計(jì)的不同可以分為兩種,即透射比濁儀測定(turbidimete rmeasure)和散射比濁儀測定(nephelomete rmeasure)。比濁儀測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減,其讀數(shù)以吸光度A表示。A反映了入射光與透射光的比率(A=2一lg10T,T代表濁度百分比)。散射比濁儀測定是測量入射光遇到質(zhì)點(diǎn)(復(fù)合物)后呈一定角度散射的光量,該散射光經(jīng)放大后以散射值表示。
透射光和散射光測定比較
Rayleigh、Debye和Mei等分別對光散射現(xiàn)象進(jìn)行了系統(tǒng)研究,認(rèn)為光散射強(qiáng)度10)與入射光強(qiáng)度(Iθ)的關(guān)系符合下述公式:
Iθ=Io×8π4×N×α2(1+COS2θ)/γ2×入2。
亦可表示如下:
Iθ=Io ×(24π3/λ4)×N×γ2×[(n2-n02)/(n2+2n02)]×(1+COS2θ)。
式中入和I0分別表示入射光的波長和強(qiáng)度,θ表示光信號檢測器與入射光之間的夾角,Iθ表示與入射光束成θ角度處散射光的強(qiáng)度,r表示微粒分子至檢測器的距離,α表示分子極化率,N表示每單位容積分子數(shù)目,n和n。分別為粒子和溶劑的折射率。
在免疫化學(xué)反應(yīng)中,可溶性抗原與抗體反應(yīng),形成免疫復(fù)合物,反應(yīng)系統(tǒng)中的粒子由小變大,相應(yīng)地也會出現(xiàn)散射光強(qiáng)度隨角度而變的情況。因此上述理論為免疫濁度法的研究、儀器和試劑的設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化及臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。
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