目前，應用zui廣泛的免疫學方法是酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）。該方法從抗體的包被到酶聯(lián)顯色，都已經具備了成熟的技術，易于制備試劑盒，操作簡單，特異性好，靈敏度高。   

 

    由于V．p臨床分離株大多為TDH’株，TRH（thermostable related hemolysin）陽性株只占10％一15％，少數(shù)為TDH和TRH雙陽性，環(huán)境分離株幾乎無TDH+，所以大多研究者主要選擇TDH、TRH為抗原，制備相應的抗體進行檢測。ELISA抗體的包被與固定是關鍵，影響檢測的靈敏度和特異性。Honda等設計了一種新的固定方法，即用HCl、聚乙烯（p01ythylenceirnine，PEl）、甲基乙烯基馬來酸酐聚合醚（malwie anhydride methylvinyl ether copolymer，MAMEC）等化學試劑處理尼龍膜，接著固定包被TDH和TRH的單克隆抗體，然后與V·p培養(yǎng)肉湯中TDH或TRH反應15min，洗滌后，與抗TDH、TRH的兔血清多克隆抗體37℃反應15min，再與堿性磷酸酶標記的抗兔抗體IgG反應，zui后底物顯色。結果顯示，經過緊密相連的三次抗原抗體反應，特異性100％，靈敏度95．15％，并且通過肉眼觀察就能區(qū)分TDH株和TRH株。同時，該尼龍膜也可以直接用于檢測糞便標本，特異性達88．9％，靈敏度達92％，并能在1h內完成檢測。此固定方法減少非特異性吸附，增強抗體結合度，從而增強了特異性，提高了靈敏度。但是，這種方法涉及抗體包被、固定、抗體的標記、顯色等步驟，操作煩瑣，技術要求高，而且尼龍膜不能長期保存，不能進行大規(guī)模臨床檢測。同時，直接檢測時，抗原量可能不足，抗原位點也容易改變，導致出現(xiàn)新的血清型，如近年來出現(xiàn)新的03：K6血清型，zui終造成漏檢。