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乳膠顆粒凝集試驗(yàn)(LPAT)檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素

來源:上海源葉生物科技有限公司   2011年01月12日 10:32  
 
    由Finkelstein等建立,方法如下。
 
    ①乳膠敏化  取lOlL羊抗人源LT-I血清與19Oμl pH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻,再加等體積乳膠制劑,混勻,37℃水浴孵育2h,每15min振搖1次,然后加入用上述緩沖液稀釋的O.1%牛血清白蛋白600uL,3Orain而后即可使用。
 
    ②待檢菌液制備  從MacC或EMB或;HE等瓊脂上挑取待檢菌落,在裝有3Ortl的20000U/ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液,37℃水浴溫育5~3Omin(視菌液濃度而定),離心沉淀細(xì)胞,上清液待檢。
 
    ③正式試驗(yàn)  在玻片上加10uL待檢上清和5,aL致敏乳膠,混勻,輕輕搖動3min,在斜射光下觀察結(jié)果,判定標(biāo)準(zhǔn)同一般凝集試驗(yàn)。如用抗LT全
 
    由Finkelstein等建立,方法如下。
 
    ①乳膠敏化  取lOlL羊抗人源LT-I血清與19Oμl pH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻,再加等體積乳膠制劑,混勻,37℃水浴孵育2h,每15min振搖1次,然后加入用上述緩沖液稀釋的O.1%牛血清白蛋白600uL,3Orain而后即可使用。
 
    ②待檢菌液制備  從MacC或EMB或;HE等瓊脂上挑取待檢菌落,在裝有3Ortl的20000U/ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液,37℃水浴溫育5~3Omin(視菌液濃度而定),離心沉淀細(xì)胞,上清液待檢。
 
    ③正式試驗(yàn)  在玻片上加10uL待檢上清和5,aL致敏乳膠,混勻,輕輕搖動3min,在斜射光下觀察結(jié)果,判定標(biāo)準(zhǔn)同一般凝集試驗(yàn)。如用抗LT全血清致敏乳膠,檢測敏感性為印g/m1的LT;若以親和層析純LT抗體敏化乳膠,其靈敏度可達(dá)O.O32ug/m1的LT,且無假陽性結(jié)果。本法還能檢測豬源LT-1。Scotland等用這類商品化試劑盒檢測了1OO株大腸桿菌,其結(jié)果與Y1細(xì)胞法*吻合。
 
    Honda等已報(bào)道用LT抗體致敏的葡萄球菌凝集試驗(yàn)宋檢測LT,其原理與上法相似。 血清致敏乳膠,檢測敏感性為印g/m1的LT;若以親和層析純LT抗體敏化乳膠,其靈敏度可達(dá)O.O32ug/m1的LT,且無假陽性結(jié)果。本法還能檢測豬源LT-1。Scotland等用這類商品化試劑盒檢測了1OO株大腸桿菌,其結(jié)果與Y1細(xì)胞法*吻合。
 
    Honda等已報(bào)道用LT抗體致敏的葡萄球菌凝集試驗(yàn)宋檢測LT,其原理與上法相似。

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