干細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
1. 凍存細胞
(1)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。
(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液,計數(shù),使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。
(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
(4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。
(5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。
操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。 細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
1. 凍存細胞
(1)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。
(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)干細胞制備成懸液,計數(shù),使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。
(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
(4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。
(5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。
操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。
NK-2R peptide 神經激肽A受體(多肽抗原) * 規(guī)格: 0.5mg
Calpain 1 鈣蛋白酶(多肽) 進口/國產 規(guī)格: 0.5mg
Tanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS 炎癥負調控因子蛋白(抗原) 現(xiàn)貨供應 規(guī)格: 0.5mg
Tau protein 微管相關蛋白(抗原) * 規(guī)格: 0.5mg
干細胞
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