(1)農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化法 將外植體放入含有外源基因的農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中浸泡,然后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基誘導抗性愈傷組織和抗性芽,生根后的抗性植株移栽至營養(yǎng)缽生長。
(2)基因槍法 又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金?;蜴u粒表面,然后在高壓的作用下,微粒被高速射入受體細胞或組織,微粒上的外源DNA進入細胞后,整合到植物染色體上,得以表達,從而實現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化。
(3)花粉管通道法 在植物授粉時將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導入受精卵細胞,并進一步地整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發(fā)育而成為含轉(zhuǎn)基因的新個體。該方法于80年代初期由我國學者周光宇提出。我國目前推廣面積zui大的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的zui大優(yōu)點是不依賴組織培養(yǎng)人工再生植株,技術簡單,不需要裝備精良的實驗室,常規(guī)育種工作者易于掌握。
(4)微注射法 首先制備植物原生質(zhì)體,游離出細胞,在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下,將目的基因DNA通過微管注射到受體細胞中。
(5)電穿孔法 在短時間的高壓直流電脈沖的沖擊下,可以使原生質(zhì)膜的分子疏松,形成暫時性的直徑為3~4nl-n的小孔,但對原生質(zhì)體生活力影響不大。這時,存在于原生質(zhì)體周圍溶液中的外源DNA,就可以通過這種小孔進入原生質(zhì)體,實現(xiàn)基因的直接轉(zhuǎn)移。
(6)微束激光打孔法 原生質(zhì)體在短時間的微束激光照射下,可在質(zhì)膜表面形成面積約0.25Pm2左右的小孔,使DNA分子進入細胞。
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