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氣溫驟升ELISA試劑盒做試驗需謹慎

來源:上海信裕生物科技有限公司   2017年09月05日 16:47  

氣溫驟升ELISA試劑盒做試驗需謹慎

1、ELISA試劑盒的預備
按ELISA試劑盒說明書的請求預備試驗中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液運用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次試驗不需用的有些應及時放回冰箱保存。
2、保溫
在ELISA中通常有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶物后??乖贵w反響的完結需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。
ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的時機,只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐漸平衡的進程,因而需經(jīng)擴散才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這即是為何ELISA反響老是需求必定時刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體的適宜溫度。ELISA試劑盒在樹立ELISA辦法作反響動力學研究時,試驗標明,兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)品的生成可達。為加快反響,可進步反響的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中夜,以構成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA中通常不予選用。
保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,通常均選用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸發(fā),板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的請求操控溫育。室溫溫育時,ELISA板只需平置于操作臺上即可。應留意溫育的溫度和時刻應按規(guī)則力求。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。
ELISA試劑盒運用留意事項
1、試劑蛻變的痕跡發(fā)色試劑有任何色彩標明發(fā)色劑蛻變,應當棄之。0規(guī)范的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑也許蛻變。
2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致一切規(guī)范的OD值偏低。
3、在洗板進程中假如呈現(xiàn)板孔干燥的狀況,則會呈現(xiàn)規(guī)范曲線不成線性,重復性欠好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
4、每加一種試劑前需將其搖勻。
5、在參加底物液A液和底物液B液后,通常顯色時刻為15~20min即可。若色彩較淺,可延長反響時刻到30min。反之,則減短反響時刻。
6、反響停止液為2M硫酸,防止觸摸肌膚。
7、不要運用過了有用日期的ELISA試劑盒;也不要運用過了有用期的試劑盒中的任何試劑,摻雜運用過了有用期的ELISA檢查試劑盒會引起活絡度的下降;不要交換運用不一樣批號試劑盒中的試劑。
當然除了留意以上幾點外,選對ELISA試劑盒也很要害,可以大大下降試驗危險性。

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