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激光共焦顯微鏡的工作原理分析
激光共焦顯微鏡基于模塊化概念而設(shè)計，可集成多種功能，不僅包括納米技術(shù)，還可靈活升級到受激發(fā)射損耗系統(tǒng)(STED)。更有超高分辨率激光掃描共聚焦顯微鏡，激光共焦顯微鏡采用*光學(xué)技術(shù)，滿足您對分辨率的高要求。激光共焦顯微鏡是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一項(xiàng)具有劃時代意義的高科技新產(chǎn)品，是當(dāng)今世界的細(xì)胞生物學(xué)分析儀器。激光共焦顯微鏡是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針，利用計算機(jī)進(jìn)行圖象處理，對生物樣品進(jìn)行定性、定量、定時和定位研究。激光共焦顯微鏡已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、解剖學(xué)、胚胎學(xué)、免疫學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)等領(lǐng)域。
激光共焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描，標(biāo)本上的被照射點(diǎn)，在探測針孔處成像，由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收，迅速在計算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點(diǎn)同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔，焦平面以外的點(diǎn)不會在探測針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面，激光共焦顯微鏡克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。
激光共焦顯微鏡利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測，來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點(diǎn)上，該點(diǎn)所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上，該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋。激光共焦顯微鏡照明針孔與探測針孔對被照射點(diǎn)或被探測點(diǎn)來說是共軛的，因此被探測點(diǎn)即共焦點(diǎn)，被探測點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計算機(jī)以像點(diǎn)的方式將被探測點(diǎn)顯示在計算機(jī)屏幕上，為了產(chǎn)生一幅完整的圖像，由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描，從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺沿著Z軸上下移動，將樣品新的一個層面移動到共焦平面上，樣品的新層面又成像在顯示器上，隨著Z軸的不斷移動，激光共焦顯微鏡就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。
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