隨著微生物菌種產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，菌種需要量隨之增加，而現(xiàn)有菌種單位明顯偏少，許多菇農(nóng)不得不向外引種。長(zhǎng)途購(gòu)運(yùn)菌種不僅花費(fèi)大，成本高；而且菌種因破瓶而易引起雜菌污染，從而嚴(yán)重影響栽培食用菌的經(jīng)濟(jì)效益。菇農(nóng)若能掌握菌種程序和制種技術(shù)，實(shí)行自行制種，逐步發(fā)展成制種專業(yè)戶，也是一項(xiàng)很好的致富門(mén)路。

菌種程序，通常分為母種、原種、栽培種3個(gè)層次，也就是通常所說(shuō)的一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)菌種。其中母種的分離選育技術(shù)性強(qiáng)，要求精細(xì)；而原種和栽培種的制作則比較簡(jiǎn)單。下面介紹各級(jí)菌種的制作技術(shù)。

一、母種的分離選育

母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質(zhì)融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種，具體步驟與操作方法如下：

1．采集種源：從野生或人工栽培群體中，選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。種菇的標(biāo)準(zhǔn)是：八成熟，朵形圓正，肉質(zhì)肥厚，無(wú)病蟲(chóng)為害。采集1——2朵符合上述標(biāo)準(zhǔn)的種菇編上號(hào)碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應(yīng)標(biāo)有原菌株代號(hào)。

2．培養(yǎng)基配制：瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基，常用配方為：馬鈴薯200——250g，瓊脂15——20g，葡萄糖20——25g，清水1000ml。也可以加硫酸鎂1——1．5g，微生素B1微量，磷酸二氫鉀2——3g。先將馬鈴薯洗凈去皮，切成薄片，置于鋁鍋內(nèi)加水煮沸30分鐘，撈起后用4層紗布過(guò)濾，取汁。然后將瓊脂加入汁內(nèi)，邊加熱邊攪拌，讓瓊脂充分溶化；再將葡萄糖等加入，稍煮幾分鐘后，同樣用4層紗布過(guò)濾，取其汁液。將汁液趁熱裝入試管內(nèi)，裝至管長(zhǎng)的1/5，管口用(19720,-65.00,-0.33%)塞緊，或?qū)⒅貉b入玻璃三角瓶?jī)?nèi)，裝置20ml。然后置于高壓鍋內(nèi)，在98——108千帕／平方厘米的壓力下滅菌30分鐘左右。滅菌后及時(shí)取出，趁熱將試管斜排于桌上，冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。

3.母種分離方法：有孢子彈射、組織分離和基內(nèi)分離3種方法。①孢子彈射法：將種菇表面消毒，吸干水分后，將菇體懸掛于裝有瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶?jī)?nèi)，讓菇體內(nèi)的孢子自然散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲。也可以剪取一小塊菇體，貼附在試管斜面培養(yǎng)基表面，讓孢子散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲，即能獲得母種。②組織分離法：將消毒過(guò)的種菇，在接種箱內(nèi)用手從菇柄處對(duì)半掰開(kāi)，或用刀片切開(kāi)，使菇體形成對(duì)開(kāi)。在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處，用接種刀切取一小塊菇體，然后縱切成5mmX10mm的小薄片，用接種針挑取一塊薄片，接入斜面培養(yǎng)基的中央，每支試管接種一小塊薄片，待其萌發(fā)菌絲，即可得到母種。③基內(nèi)分離法：選擇已長(zhǎng)菇的木段，削去樹(shù)皮及表層木質(zhì)部，用70％的酒精消毒后，鋸成1cm厚的薄片，放入0.1％汞水中消毒1——2分鐘，再用滅菌水洗去殘液。然后再將小薄片劈成0．5——1cm寬的小條，接入斜面培養(yǎng)基中央，待長(zhǎng)出菌絲后即得母種。也可以在已長(zhǎng)菇的菌袋中，經(jīng)消毒處理后，用接種針鉤取袋內(nèi)色澤純、長(zhǎng)勢(shì)旺的菌絲體，接種在試管斜面培養(yǎng)基中央，待萌發(fā)菌絲后，同樣獲得母種。

4.造溫培養(yǎng)：通過(guò)上述不同方式將菌種分離接種于試管后，要及時(shí)將試管移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在25℃左右，使分離獲得的孢子或菌絲在適溫下發(fā)育。一般孢子彈射3——4天后孢子萌發(fā)成菌落，10天后菌絲長(zhǎng)滿管；組織分離接種后2——3天，菌絲即萌發(fā)，并在培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)；菇木分離接種后，3——7天菌絲即恢復(fù)生長(zhǎng)。

5.進(jìn)育提純：通過(guò)上述方法得到的菌絲，不一定都是的，還需要選育提純。因此，在菌絲萌發(fā)后，要認(rèn)真觀察，挑選色澤純、健壯、長(zhǎng)勢(shì)正常、無(wú)間斷的菌絲，在接種箱內(nèi)連同培養(yǎng)基鉤取菌絲，接入另備的試管培養(yǎng)基上。在23——25℃的恒溫條件下，培育7——10天，待菌絲長(zhǎng)滿管后，再進(jìn)行觀察，從中擇優(yōu)取用，即為“母代”母種。

6．轉(zhuǎn)管擴(kuò)接：微生物菌種母代母種可以轉(zhuǎn)管擴(kuò)接成“子代”母種。采用同樣的斜面培養(yǎng)基，每支可擴(kuò)接30——50支子代母種。上供應(yīng)的多為子代母種，它可以再次轉(zhuǎn)管擴(kuò)接，一般每支可擴(kuò)接成20——25支子代母種，但轉(zhuǎn)管次數(shù)不得超過(guò)5次。

7.出菇試驗(yàn)：分離選育的母種，還必須進(jìn)行出菇試驗(yàn)。方法是：把母種接種于瓶或袋裝的木屑培養(yǎng)基上，根據(jù)各種菇耳種性對(duì)溫度的要求，進(jìn)行適溫培養(yǎng)，直至出菇才證實(shí)可用于。
包裝：    Many types of cells        原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    500/250/100
包裝：    Many types of cells        原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    5/2.5/1ml
包裝：    Many types of cells        原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    500/250/100ml
包裝：    Many types of cells        原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    5/2.5/1ml
包裝：    Many types of cells        原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    500/250/100ml
包裝：    Many types of cells        原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    5/2.5/1ml
包裝：    Many types of cells        原代軟骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    500/250/100ml
包裝：    Many types of cells        原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    5/2.5/1ml
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