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層析柱使用常見問(wèn)題盤點(diǎn)
“ 層析柱進(jìn)氣泡怎么辦？ ”
答疑解惑層析柱進(jìn)氣泡有多種可能的原因，對(duì)于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決氣泡困擾：
1.空氣進(jìn)入層析柱（如：緩沖液走空，連接層析柱進(jìn)入系統(tǒng)過(guò)程中等）
用純水反向沖洗層析柱（如有柱位閥可直接切換流向，沒(méi)有的話可將柱子反接
對(duì)于大多數(shù)層析柱來(lái)說(shuō)可用乙醇沖洗，以提高排除氣泡的效率
2.緩沖液中有氣泡采取預(yù)防措施將緩沖液脫氣
在緩沖液入口使用空氣感應(yīng)器
使用限流閥
3.溫度影響（在冷室操作后緊接著在室溫操作或低溫緩沖液直接在室溫使用）采取預(yù)防措施允許緩沖液在使用前達(dá)到熱平衡
“ 層析柱干了還可以再使用嗎？ ”
答疑解惑通常來(lái)說(shuō)是不可以的，但也取決于您的純化需求。如果您的層析柱看起來(lái)像圖中這樣，不妨一試?？蓪⑷芤阂越咏盍蟴ui大耐受壓力的流速流經(jīng)層析柱以排除空氣。結(jié)束之后，進(jìn)行柱效測(cè)定，滿足您的要求便可繼續(xù)使用；如未成功排除氣泡，則層析柱需要重裝。
“ 膠平面與柱頭有間隙怎么辦？ ”
答疑解惑造成間隙的有多種可能的原因，對(duì)于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決間隙困擾
1.由于不當(dāng)裝填或者篩網(wǎng)孔徑與填料粒徑不匹配，導(dǎo)致填料漏出
更換篩網(wǎng)，重新裝填
2.層析柱堵塞，導(dǎo)致反壓增大
根據(jù)說(shuō)明書清洗層析柱
更換濾膜采取預(yù)防措施澄清樣品
3.柱床裝填太差（裝柱過(guò)程中未有效壓縮填料）
調(diào)整柱頭高度，測(cè)柱效
4.填料被用于條件，如有機(jī)溶劑
檢查緩沖液選擇更加合適的使用條件
“ 怎樣避免由于樣品導(dǎo)致的壓力增大 ”
答疑解惑不同雜質(zhì)會(huì)帶來(lái)不同的不良影響，對(duì)于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決壓力增大困擾
1.顆粒性物質(zhì)——堵塞濾膜和層析柱離心過(guò)濾有吸附的小體積樣品可用10000 g 離心15分鐘
細(xì)胞裂解液可50000g離心30分鐘過(guò)濾醋酸纖維素膜或PVDF膜具有zui少的非特異性蛋白吸附
選擇合適孔徑的濾器
2.沉淀——聚集體堵塞層析柱
過(guò)濾
通過(guò)改變pH，加鹽或添加劑穩(wěn)定樣品或減少聚體產(chǎn)生
避免機(jī)械壓力和過(guò)高的蛋白濃度
3.核酸——過(guò)高粘度可能會(huì)封閉填料上的配基
加入核酸酶
使用硫酸鏈霉素，聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
4.脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
離心
使用硫酸銨，硫酸葡聚糖或PVP沉淀
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