層析柱使用常見問題盤點(diǎn)
“ 層析柱進(jìn)氣泡怎么辦? ”
答疑解惑層析柱進(jìn)氣泡有多種可能的原因,對于這些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解決氣泡困擾:
1.空氣進(jìn)入層析柱(如:緩沖液走空,連接層析柱進(jìn)入系統(tǒng)過程中等)
用純水反向沖洗層析柱(如有柱位閥可直接切換流向,沒有的話可將柱子反接
對于大多數(shù)層析柱來說可用乙醇沖洗,以提高排除氣泡的效率
2.緩沖液中有氣泡采取預(yù)防措施將緩沖液脫氣
在緩沖液入口使用空氣感應(yīng)器
使用限流閥
3.溫度影響(在冷室操作后緊接著在室溫操作或低溫緩沖液直接在室溫使用)采取預(yù)防措施允許緩沖液在使用前達(dá)到熱平衡
“ 層析柱干了還可以再使用嗎? ”
答疑解惑通常來說是不可以的,但也取決于您的純化需求。如果您的層析柱看起來像圖中這樣,不妨一試。可將溶液以接近填料zui大耐受壓力的流速流經(jīng)層析柱以排除空氣。結(jié)束之后,進(jìn)行柱效測定,滿足您的要求便可繼續(xù)使用;如未成功排除氣泡,則層析柱需要重裝。
“ 膠平面與柱頭有間隙怎么辦? ”
答疑解惑造成間隙的有多種可能的原因,對于這些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解決間隙困擾
1.由于不當(dāng)裝填或者篩網(wǎng)孔徑與填料粒徑不匹配,導(dǎo)致填料漏出
更換篩網(wǎng),重新裝填
2.層析柱堵塞,導(dǎo)致反壓增大
根據(jù)說明書清洗層析柱
更換濾膜采取預(yù)防措施澄清樣品
3.柱床裝填太差(裝柱過程中未有效壓縮填料)
調(diào)整柱頭高度,測柱效
4.填料被用于條件,如有機(jī)溶劑
檢查緩沖液選擇更加合適的使用條件
“ 怎樣避免由于樣品導(dǎo)致的壓力增大 ”
答疑解惑不同雜質(zhì)會帶來不同的不良影響,對于這些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解決壓力增大困擾
1.顆粒性物質(zhì)——堵塞濾膜和層析柱離心過濾有吸附的小體積樣品可用10000 g 離心15分鐘
細(xì)胞裂解液可50000g離心30分鐘過濾醋酸纖維素膜或PVDF膜具有zui少的非特異性蛋白吸附
選擇合適孔徑的濾器
2.沉淀——聚集體堵塞層析柱
過濾
通過改變pH,加鹽或添加劑穩(wěn)定樣品或減少聚體產(chǎn)生
避免機(jī)械壓力和過高的蛋白濃度
3.核酸——過高粘度可能會封閉填料上的配基
加入核酸酶
使用硫酸鏈霉素,聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
4.脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
離心
使用硫酸銨,硫酸葡聚糖或PVP沉淀
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