MB80042.2 v.A

 冰凍切片組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

 冰凍切片組織琥珀酸脫氫酶（SDH）活性染色試劑是一種旨在使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過(guò)反應(yīng)系統(tǒng)的作用，組織樣本中酶活性部位呈現(xiàn)出藍(lán)黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種動(dòng)物組織冰凍切片樣品琥珀酸脫氫酶的活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，顯色清晰。

技術(shù)背景

琥珀酸脫氫酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環(huán)（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素，位于線粒體內(nèi)膜，參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個(gè)單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生延胡索酸（furmarate），通過(guò)黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理，使用人工電子受體染料硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來(lái)自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH₂）的電子，而被還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)色或藍(lán)黑色甲暨色素。據(jù)此證明組織細(xì)胞琥珀酸脫氫酶的活性。

產(chǎn)品內(nèi)容

 清理液（Reagent A）  100毫升

 染色液（Reagent B）   10毫升

 反應(yīng)液（Reagent C）    1毫升

 固著液（Reagent D）   10毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

保存方式

保存 染色液（Reagent B）和 反應(yīng)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

中性樹(shù)脂：用于切片封片

光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

染色開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取900微升 染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入100微升 反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為 染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 取出待測(cè)的10微米厚的冰凍組織切片 
• 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升  染色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的 染色工作液
• 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8二次
• 小心加上200微升 固著液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育15分鐘
• 小心移去切片上的 固著液（Reagent D）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
• 放上蓋玻片或封片（中性樹(shù)脂）
• 即刻在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)琥珀酸脫氫酶活性的組織細(xì)胞為陽(yáng)性組織細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)黑色。

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
•  反應(yīng)液（Reagent C）避免反復(fù)凍融
• 陰性對(duì)照時(shí)，GENMEN染色工作液不含有 反應(yīng)液（Reagent C）
• 可以使用50毫摩爾丙二酸鈉（Sodium malonate）作為抑制劑
• 每次更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿切片表面
• 整個(gè)操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
• 染色孵育時(shí)間，根據(jù)樣品和酶活性強(qiáng)弱調(diào)整，通常為5至30分鐘
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰