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降鈣素ELISA試劑盒具體操作步驟

來源:上海撫生實業(yè)有限公司   2017年12月11日 09:25  

降鈣素ELISA試劑盒具體操作步驟:
1.電泳結束后,切取少量含有MARK蛋白以及少許樣品的小部分凝膠進行染色,其余部分用保鮮膜包好,放在4℃冰箱保存。
取凝膠放入適量考馬斯亮藍染色液中,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動,室溫染色1小時或更長時間。
注:具體的染色時間取決于凝膠的厚度和染色時的溫度。凝膠較厚,溫度較低,則染色時間宜適當延長。凝膠較薄,溫度較高,則染色時間可以適當縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近,在染色液中幾乎看不清凝膠時,可以認為已染色充分。染色2-4個小時或更長時間不會對*終的染色效果產(chǎn)生負面影響。
2 倒出染色液。染色液可以回收重復使用至少2-3次。
3 加入適量考馬斯亮藍染色脫色液,確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動,室溫脫色4-24小時。期間更換脫色液2-4次,直至藍色背景基本上全部被脫去,并且蛋白條帶染色效果達到預期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時后即可出現(xiàn)。
注:脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙,可以使部分染料吸附在吸水紙上,加快脫色。脫色時間過長也會導致蛋白條帶的顏色變淺。
4 完成脫色后,用ddH2O浸泡,至于未染色凝膠長度相等時,參照MARK蛋白,與未染色凝膠對比,切下所需蛋白成分的凝膠,收集起來。然后把所要提純的蛋白從凝膠中分離出來。
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