收集各組腫瘤細胞,進行細胞計數(shù),加入適量 Wash Buffer 液洗滌,1500 rpm 離心 5 min,去上清,加入 50 μl Wash Buffer 重懸。
(可選)Live dead 染色,每管加 0.1 μL Zombie GreenTM Dye(樣品多時使用時可先稀釋),震蕩混勻,室溫避光孵育 10~15 min。Wash Buffer 液洗滌,1 500 rpm 離心 5 min,棄上清。
封閉 Fc 受體:每管中加入 1 μg/106 細胞 Anti-Mouse CD16/CD32 抗體封閉熒光抗體 Fc 受體引起的非特異性染色。震蕩混勻,4℃ 孵育 30 min(或室溫避光 15 min)。Wash Buffer 液洗滌,1 500 rpm,離心 5 min,棄上清。
用適量體積 Wash Buffer 液重懸每個樣本,將各組細胞等細胞數(shù)混合后分裝到單染管和不染抗體管,作為流式檢測時調(diào)節(jié)電壓。
單染管中加入相應(yīng)表面染色抗體,同時在每個樣本中加入 1 μL percp CD3/106 細胞和 0.5 μL PE CD4/106 細胞,震蕩混勻,4℃ 避光孵育 30 min(或室溫避光 15 min)。
用 Wash Buffer 液洗滌,1500 rpm 離心 5 min,棄上清。
腫瘤細胞打孔或者加入 200 μL 1% PFA(多聚甲醛)固定過夜。
61336-70-7 Amoxicillin 阿莫西林標準品 200mg
69-53-4 Ampicillin 氨芐青霉素標準品 200mg
7177-48-2 Ampicillin Trihydrate 氨芐青霉素三水酸標準品 200mg
121-25-5 Amprolium 安普羅銨標準品 200mg
120511-73-1 Anastrozole 阿那曲唑標準品 200mg
Anecortave Acetate 醋酸阿奈可他標準品 200mg
154-68-7 Antazoline Phosphate 磷酸安他唑啉標準品 200mg
1143-38-0 Anthralin 地蒽酚標準品 200mg
60-80-0 Antipyrine 安替比林標準品 200mg
88495-63-0 Artesunate 青蒿琥酯標準品 200mg
腫瘤細胞
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