全組織NADH心肌黃酶活性染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

 全組織NADH心肌黃酶活性染色試劑是一種旨在使用人工電子受體染料二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（MTT），受到NADH心肌黃酶催化還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)黑*素沉淀，來(lái)分析全組織樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種動(dòng)物組織的心肌黃酶活性定性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

心肌黃酶（Diaphorase），又稱為硫辛酰胺脫氫酶（lipoamide dehydrogenase），黃遞酶，二氫硫辛酰胺脫氫酶（dihydrolipoamide dehydrogenase），二氫硫辛酸脫氫酶（dihydrolipoyl dehydrogenase）等。因早期從豬心肌中提取，產(chǎn)品又呈現(xiàn)熒光的黃綠色蛋白質(zhì)，故被稱為心肌黃酶。分子量102000至110000。NADH心肌黃酶直接和黃素蛋白（Flavoprotein）反應(yīng)，釋放出氫原子，將氧化型黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）還原為還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（FADH2），傳遞氫原子給氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），而形成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH），作為電子供體，還原人工電子受體，例如染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），產(chǎn)生不溶性甲暨色素，由此用于鑒別內(nèi)臟神經(jīng)組織等各種動(dòng)物組織。

產(chǎn)品內(nèi)容

 清理液（Reagent A）  毫升

 染色液（Reagent B）  毫升

 反應(yīng)液（Reagent C）  毫升

 固著液（Reagent D）  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書  1份

保存方式

保存 染色液（Reagent B）和 反應(yīng)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

光學(xué)顯微鏡：用于染色后切片觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取2.7毫升 染色液（Reagent B）到新的15毫升錐形離心管，加入300微升 反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為 染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備1個(gè)6孔細(xì)胞培養(yǎng)板
• 放進(jìn)新鮮切除的動(dòng)物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長(zhǎng)；如果過大，刀切處理一下）
• 將組織壓平
• 小心加入xx毫升 清理液（Reagent A），清洗組織樣本
• 小心抽去清理液
• 小心加入xx毫升 染色工作液，浸沒整個(gè)組織
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育60分鐘，避免光照
• 小心抽去 染色工作液
• 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A），清洗組織樣本
• 小心抽去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次
• 小心加入xx毫升 固定液（Reagent B），浸沒整個(gè)組織
• 在室溫下孵育15分鐘
• 小心抽去固定液
• 小心加入xx毫升 清理液（Reagent A），清洗組織樣本
• 在室溫下孵育15分鐘
• 小心抽去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟15至17二次
• 后續(xù)石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）
• 在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)NADH心肌黃酶的組織細(xì)胞為陽(yáng)性組織細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)黑色

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
•  反應(yīng)液（Reagent C）避免反復(fù)凍融
• 陰性對(duì)照時(shí)， 染色工作液不含有 反應(yīng)液（Reagent C）
• 心肌組織可以用于陽(yáng)性對(duì)照
• 用戶根據(jù)實(shí)際需求，按比例配制試劑用量
• 整個(gè)操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
• 染色孵育時(shí)間，根據(jù)樣品和酶活性強(qiáng)弱調(diào)整，通常為60分鐘
• 全組織染色存在其染色不均勻、組織內(nèi)部染色滲透困難等局限
• 染色后的后續(xù)處理的切片樣品可以長(zhǎng)期保存，同樣須避免光照
• 本公司提供NADH心肌黃酶活性NBT染色試劑產(chǎn)品
• 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰