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在使用Hamilton 陰離子交換柱之前,你要充分地熟悉Hamilton 陰離子交換柱的使用規(guī)則。
1.簡(jiǎn)介
柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陰離子交換材料,含有季胺功能團(tuán)。特別設(shè)計(jì)用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無機(jī)陰離子。
2.洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液要求低電導(dǎo),或者UV吸收的緩沖液,例如磷酸緩沖液,pH范圍從2.5到6.5。
不能使用水楊酸緩沖液,因?yàn)樗畻钏岱纸猱a(chǎn)物會(huì)改變固定相的性質(zhì)。另外,硝酸銨(1mM)可以改善峰型,而且不會(huì)明顯影響保留時(shí)間,檢測(cè)或定量結(jié)果。
洗脫液在使用以前要脫氣,并用0.45微米濾膜過濾,防止發(fā)生檢測(cè)和泵送問題。
一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長(zhǎng),否則你的柱子會(huì)堵塞,柱壓會(huì)升高到無法接受的水平。
3.色譜柱老化
在開始分析工作以前,柱子必須經(jīng)過正確的老化。一個(gè)沒有正確老化的柱子可能會(huì)帶來問題,諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。
要老化這類柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡。
在發(fā)貨以前,每根柱子都已經(jīng)測(cè)試過并進(jìn)行了老化。因此沒有必要在*次使用時(shí)用水沖洗)。
4.樣品準(zhǔn)備
保持柱子長(zhǎng)壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚怼Ｄ惚仨毞乐箤⑹杷?與流動(dòng)相極性差別很大的化合物泵入色譜柱,不管是來自流動(dòng)相還是樣品。特別地,要禁止導(dǎo)入顆粒雜質(zhì)。這些zui終都會(huì)造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。
5.流量和壓力
注意:zui高壓力:不銹鋼柱:4500psi;玻璃柱:3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動(dòng)。
如果你想更換柱子,,要降低流量至0,等待洗脫液*流出柱子為止(2分鐘)。
拆除柱子而沒有等待壓力的降低會(huì)損壞柱子。
高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。
使用保護(hù)柱(見第6節(jié))會(huì)防止污染物沉積在分析柱上。
6.保護(hù)柱
一定要使用保護(hù)柱,因?yàn)闃悠泛拖疵撘何廴究赡軙?huì)造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對(duì)于ChromSep柱我們建議使用ChromSepAnion交換保護(hù)柱。當(dāng)柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時(shí)候就需要更換保護(hù)柱了。
7.進(jìn)樣量和濃度
當(dāng)樣品的洗提強(qiáng)度比洗脫液低(在柱樣品預(yù)濃縮)的時(shí)候,更高的樣品量也可以注射。
8.溫度
色譜柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性,建議不要在40°C以上使用。
9.Hamilton 陰離子交換柱貯存
在貯存柱子以前,建議先用去離子水,然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
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