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凝膠色譜技術(shù)和凝膠色譜柱清洗存放

來源:東曹(上海)生物科技有限公司   2018年03月16日 09:39  
凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù),由于設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質(zhì)有很高的分離效果。
 
凝膠色譜技術(shù)是以多孔凝膠為固定相,利用凝膠孔的空間尺寸效應,使不同大小的分子按照由大到小的洗脫順序達到分離的液相色譜(HPLC)方法,從而達到凈化的目的。此外,凝膠色譜還有因為惰性微球表面對有機物吸附小所以柱污染小,以及脫鹽等優(yōu)點。
 
凝膠色譜柱的清洗:
 
為了不使被測物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來,洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液,則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來沖洗。
 
凝膠色譜柱的存放:
 
1、幾天之內(nèi)的短期放置,凝膠柱則用蒸餾水來沖洗,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
2、如果色譜柱長期不用,僅用上述方法來處理就不行了,這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱,凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會使柱效降低,此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時,一定要將色譜柱的兩端封嚴,以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導致柱效的嚴重降低。
3、色譜柱應貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環(huán)境里,柱內(nèi)就會結(jié)冰,這也將導致柱效的降低。

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