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美華儀為您介紹固相萃取

來源:北京美華儀科技有限公司   2018年04月04日 13:13  

固相萃取(Solid Phase Extraction)就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。固相萃取作為樣品前處理,在實驗室中得到了越來越廣泛的應(yīng)用。

方法建立

固相萃取

1.選擇SPE 小柱或濾膜 應(yīng)根據(jù)待測物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì), 選擇對待測物有較強保留能力的固定相。若待測物帶負(fù)電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或濾膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內(nèi)樣品, 般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。

2.活化 萃取前用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5~ 10ml 溶劑沖洗濾膜。般可用甲醇等水

溶性有機溶劑沖洗填料, 因為甲醇能潤濕吸附劑表面, 并滲透到非性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易

被水潤濕, 之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前, 應(yīng)使SPE 填料保持濕潤, 如果填料干燥會降低樣品保留值; 而各小柱的干燥程度不, 則會影響回收率的重現(xiàn)性。

3.上樣 般可采取以下措施: (1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取;(2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃取;(3) 用酸或無機鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃取;(4) 聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較, 加樣前用水或緩沖液稀釋, 時可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合, 然后萃取。速應(yīng)控制為1ml/min, 速快不利于待測物與固定相結(jié)合。

4.淋洗 反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不過個小柱的容積, 而SPE濾膜為5~10ml。

5.洗脫待測物 應(yīng)選用5~10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較靈敏度, 則可將洗脫液揮干后, 再用動相重組殘留物后樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離, 可調(diào)節(jié)pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強待測物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到*分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢速,用兩次小體積洗脫代替次大體積洗脫, 回收率更。

 

 

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