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原代細(xì)胞功能檢測方法

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2018年05月22日 15:04  

為了檢測原代細(xì)胞機體的免疫功能,可以通過體外或體內(nèi)實驗對參與免疫應(yīng)答的不同細(xì)胞進(jìn)行分離、鑒定及功能測定。用于上述免疫功能檢測的材料zui常用的是外周血,也可以是胸腺、脾、淋巴結(jié)及各種組織。
一、免疫細(xì)胞的分離
體外測定免疫細(xì)胞的功能,首先要從不同材料中分離所需細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞的表面標(biāo)志、理化性質(zhì)及功能進(jìn)行設(shè)計和選擇不同的分離方法。
(一)外周血單個核細(xì)胞的分離
外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。PBMC是免疫學(xué)實驗zui常用的細(xì)胞,也是進(jìn)行T、B細(xì)胞分離純化過程的*步。常用的分離方法是葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll-Urografin)密度梯度離心法。
(二)淋巴細(xì)胞及其亞群的分離
淋巴細(xì)胞及其亞群的分離有多種方法,如玻璃黏附法、尼龍毛分離法、E花環(huán)形成分離法等。由于單克隆抗體的應(yīng)用和免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展,可通過以下方法進(jìn)行分離。
1.免疫吸附分離法  將已知抗淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的抗體包被聚苯乙烯培養(yǎng)板,加入淋巴細(xì)胞懸液,表達(dá)相應(yīng)細(xì)胞表面標(biāo)志的淋巴細(xì)胞被貼附在培養(yǎng)板上,可與細(xì)胞懸液中其他細(xì)胞分開。
2.磁珠分離法(immune magnetic bead, IMB)  近年來免疫磁珠法應(yīng)用較廣泛,是一種特異性分離所需淋巴細(xì)胞的方法。
3.熒光激活原代細(xì)胞分離儀分離法(fluorescence  activated cell sorting, FACS)  FACS又稱流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM),是一種集光學(xué)、流體力學(xué)、電力學(xué)和計算機技術(shù)于一體,可對細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)定量測定和綜合分析方法。

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原代細(xì)胞

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