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測定原代細(xì)胞因子生物活性的四種方法

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2018年05月24日 15:28  

朋友們知道,不同的原代細(xì)胞因子是有著*的生物學(xué)活性,我們今天來看的也就是相關(guān)它,主要是來看如何測定,這里整理了幾種細(xì)致的方法,下面我們就一起來看上海恒遠(yuǎn)詳說實驗測定細(xì)胞因子生物活性的四種方法。
1、促進細(xì)胞增殖和增殖抑制法
    檢測細(xì)胞因子促生長活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時間,然后檢測增殖的細(xì)胞數(shù)。前者的增殖細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子的含量成正比,而后者的增殖細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子的含量成反比。常用的檢測細(xì)胞增殖的方法有3H-TdR摻入法、比色法、染色法和直接計數(shù)法等。其中測定細(xì)胞代謝酶反應(yīng)細(xì)胞增殖數(shù)的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法,可在酶標(biāo)檢測儀上自動化檢測,且不接觸同位素,較為常用。此外,測定代謝產(chǎn)物熒光強度的方法也可檢測增殖細(xì)胞數(shù),如ATP法和cAMP法。細(xì)胞因子還能誘導(dǎo)靶細(xì)胞表達(dá)某些表面分子或分泌一些蛋白質(zhì),可以用熒光素標(biāo)記抗體檢測表達(dá)相應(yīng)分子的細(xì)胞數(shù),或用特定方法測定細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì),間接了解細(xì)胞因子的活性。
    各種集落刺激因子、作用于造血系統(tǒng)的不同細(xì)胞,可促進其增殖及在半固體瓊脂凝膠系統(tǒng)中克隆培養(yǎng)骨髓細(xì)胞的集落形成,故可采用集落形成試驗研究CSF的水平。
2、細(xì)胞毒活性測定法
    許多細(xì)胞因子針對轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及病毒感染的細(xì)胞具有溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的活性。檢測細(xì)胞因子溶細(xì)胞/細(xì)胞毒活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時間,然后檢測存活的靶細(xì)胞數(shù),并與對照比較求得溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的百分率,或以O(shè)D值對樣品稀釋度作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線,從曲線上求得引起相應(yīng)反應(yīng)的待測樣品的含量。檢測活靶細(xì)胞數(shù)的方法同促細(xì)胞增殖法。
生物活性檢測法敏感性往往高于細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測法,且不需要各種標(biāo)記的特異性抗體,可直接反映待測細(xì)胞因子的活性水平。用生物學(xué)活性檢測法得到的細(xì)胞因子含量一般以活性單位來表示。但本法易受多種因素的干擾,且不能區(qū)分樣本中某些具有相似或相反生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子;長期培養(yǎng)的靶細(xì)胞敏感性可發(fā)生變異或所使用的不同靶原代細(xì)胞對同一種細(xì)胞因子的較敏感性存在差異等。使檢測結(jié)果難以統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。同時,因大多數(shù)細(xì)胞因子在體液中含量甚少,難以直接測定,一般均需要先進行體處誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生,才能進行上述細(xì)胞因子活性檢測。

 熱休克蛋白90αIgG 人補體7(C7)

 熱休克蛋白HSP105IgG 人補體3裂解產(chǎn)物(C3SP) 

 熱休克因子1IgG 人補體1抑制物(C1INH) 

 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2IgG 人補體1q(C1q)

 人、大、小鼠、羊、牛beta內(nèi)啡肽IgG 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)

 人、大、小鼠膜粘連蛋白 IIgG 人波形蛋白(VIM)

 人鼻咽癌癌基因IgG 人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)

 人促黃體生成素受體IgG 人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)

 人宮頸癌基因/bri3結(jié)合蛋白IgG 人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)

 人巨細(xì)胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白IgG 人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)
原代細(xì)胞

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