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干細胞轉化試驗技術:形態(tài)學檢查法

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2018年05月29日 15:00  

當機體受到抗原的刺激時,干細胞就可以轉化為淋巴母細胞,進一步轉化為致敏淋巴細胞。這種轉化在一定的程度上代表著機體的細胞免疫功能狀態(tài)。這種轉化也可在體外的T細胞的培養(yǎng)過程中加入適當?shù)拇碳ぴ霈F(xiàn),并表現(xiàn)出形態(tài)上的變化。目前常采用PHA誘發(fā)的淋巴細胞轉化試驗作為檢查機體細胞免疫的功能狀態(tài)。具體方法有形態(tài)學檢查法。

(一)操作方法 
1. 于培養(yǎng)瓶內加0.2ml馬血,對照組與試驗組各做2瓶,試驗組均加PHA 30?g; 
2.37℃培養(yǎng)72h,每天輕搖1~2次; 
3.取出培養(yǎng)瓶,搖散血,倒入離心管,3 000r/min離心10min,去上清液; 
4.用血球泥制備推片,晾干; 
5.以瑞氏染液染2min~3min,加等量緩沖液,混勻繼續(xù)染3min,蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min,餾水沖洗,晾干; 
6.鏡檢,觀察,計數(shù)。 
(二)注意事項 
1.培養(yǎng)液zui適pH為7.2~7.4,過酸過堿都會影響細胞的生長而降低轉化率。培養(yǎng)液的類型與動物的白細胞有關,如小鼠的淋轉試驗,用RPMI-1640,用199液則不成功。 
2.培養(yǎng)時間 以72h~120h轉化率zui高,超過這個時間,則轉化率反而下降。 
3.吞噬細胞有時在形態(tài)上易與“過渡型"混淆。但巨噬細胞有其固有的特點,核占細胞比較小且偏一邊,核染色質濃集,細胞漿呈藍灰色或紅褐色,胞漿內有大小不等的顆粒或吞噬物,且含有大小不等的氣泡。 
4.涂片要少蘸些細胞,推出尾部來,因淋巴細胞較大,易集中在尾部及邊緣。 
5.觀察淋巴細胞轉化,染色不要太濃,以便觀察核仁。 
6.嚴格的無菌操作,是干細胞轉化試驗成功的關鍵。

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干細胞

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