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UV2000紫外可見分光光度計的工作原理是具有限制性條件，UV2000紫外可見分光光度計的工作原理是物質(zhì)對光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。我們這里討論瑯伯-比爾定律的限制性條件。
根據(jù)量子光學(xué)理論，波長是能量的倒數(shù)，波長短能量大，容易產(chǎn)生雜散光，而220nm處屬于短波部分；根據(jù)儀器學(xué)理論中的電光源理論，氘燈在220nm處能量很小，即信號很小，容易顯現(xiàn)雜散光。
通過溶液的光必須是平行的;通過溶液的光必須是單色光;待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過高，這是瑯伯-比爾定律首要的三個前提條件。但是在實際的紫外可見分光光度計的制造和使用過程中這三個條件是不可能達到的。因為光是直線傳播的，在分光光度計制造過程中，燈源發(fā)出的光是發(fā)散的，經(jīng)過聚焦鏡進行聚焦等直到經(jīng)過溶液的整體過程中，光是不可能平行的。
燈源發(fā)出的光是復(fù)合光，經(jīng)過狹縫，再經(jīng)過光柵分光等步驟，因為受到狹縫和光柵本身的限制，光柵分光不可能達到純單色光。還有光度計的整體設(shè)計問題，光度計不可能沒有其它的雜光存在。用戶的溶液也不可能是純凈的，也會含有一些雜質(zhì)，這些對光度的吸收都會存在影響。
除以上三個方面的影響外，在實際的光度計應(yīng)用過程中還會存在其他因素的影響，例如：經(jīng)過比色皿的光是否垂直;比色皿寬度是否為10mm的標(biāo)準(zhǔn)值;測試波長是否準(zhǔn)確;程序設(shè)計是否存在漏洞等等，都會直接影響到利用瑯伯-比爾定律計算出的結(jié)果。所以在日常的測試過程中，得出的結(jié)果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的，只是我們關(guān)注偏差多少的問題。
因此，UV2000紫外可見分光光度計只測試220nm處的雜散光，不測試340nm處的雜散光，這樣是不正確的，需測試220nm處雜散光。因為根據(jù)儀器學(xué)理論中的光電發(fā)射理論，光電倍增管在220nm處的光譜響應(yīng)（靈敏度）低，容易顯現(xiàn)雜散光。而測試340nm處雜散光的原因是*不同的，因為340nm處一般是氘燈換鎢燈和儀器調(diào)換濾光片的地方，此時zui容易產(chǎn)生雜散光。
所以，對于UV2000紫外可見分光光度計來講，應(yīng)該測試220nm和340nm兩處的雜散光。UV2000紫外可見分光光度計雜散光測試步驟，首先將參比液注入配對石英石吸收池，分別放置在參比池座和試樣池座內(nèi)。再測定波段掃描基線并使之平滑。將減光片插入試樣光路的濾光片槽內(nèi)，其讀數(shù)即為減光片的衰減值K，然后將減光片插入?yún)⒈裙饴返臑V光片座內(nèi)，將石英吸收池中的蒸餾水依次換成上述截止濾光液，插入試樣試樣池座中，在相應(yīng)的波段內(nèi)掃描、打印；在記錄紙的作標(biāo)上量取測定波長處的透光度，乘以衰減值K，即得各測定波長處的雜散光值。
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