手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
美麗線蟲(chóng)（caenorhabditis）抗原的免疫定位是一種比較新的方法，其基本原理遵循組織切片染色的原則，但美麗線蟲(chóng)的角質(zhì)膜透化處理給方法學(xué)帶來(lái)更大的困難。通過(guò)一系列的強(qiáng)烈固定和透化處理步驟，角質(zhì)膜的問(wèn)題亦可克服。但由于對(duì)這種線蟲(chóng)免疫組化方面的研究起步較晚，時(shí)間相對(duì)較短， 目前僅有為數(shù)不多的可靠方法，能使抗體透過(guò)角質(zhì)膜。其方法學(xué)尚有待進(jìn)一步改進(jìn)和完善。
1．擊破角質(zhì)膜
由于角質(zhì)膜的保護(hù)作用使該類線蟲(chóng)的染色有一定困難。在幼蟲(chóng)期這一問(wèn)題尤其突出，特別是在I。1期，此期的蟲(chóng)膜對(duì)透化作用的抗性zui強(qiáng)。通過(guò)*固定及凍融可使角質(zhì)膜的二硫化物減少，從而使抗體能夠透過(guò)角質(zhì)膜。在某些情況下，也可使用膠原酶處理角質(zhì)膜。但這些方法都是比較強(qiáng)烈的，常常破壞抗原結(jié)構(gòu)，尤其是凍融過(guò)程中冰晶的形成具有強(qiáng)烈的破壞性。在許多其他系統(tǒng)中，例如，對(duì)哺乳動(dòng)物組織，并不推薦凍融，因?yàn)閮鋈诳墒菇M織和細(xì)胞受到破壞。在這種線蟲(chóng)中，反復(fù)凍融的次數(shù)應(yīng)盡可能減少。膠原酶的使用同樣有一些困難，每批膠原酶的作用不相同；每只蟲(chóng)在發(fā)育的不同階段，其敏感性亦不同。因此，在對(duì)這種線蟲(chóng)進(jìn)行免疫染色時(shí)，應(yīng)注意調(diào)整實(shí)驗(yàn)的條件以適合形成抗原抗體復(fù)合物的所需量。
2．方法概述
實(shí)驗(yàn)方案概括為在多聚甲醛／Bouin固定液中固定，通過(guò)凍融進(jìn)行透化處理；在某些情況下也可通過(guò)膠原酶處理，或用還原劑處理以打開(kāi)角質(zhì)膜，然后加入抗體便可透過(guò)角質(zhì)膜。對(duì)這種線蟲(chóng)的免疫染色檢測(cè)可以使用熒光染料標(biāo)記的二級(jí)試劑。
下面討論的實(shí)驗(yàn)方案分為兩部分。*部分列出兩種固定方法；第二部分為抗體的加入和檢測(cè)步驟，這些對(duì)所有蟲(chóng)體的染色程序都適用。在*部分中介紹Bouin液和多聚甲醛固定方法。如無(wú)特殊需要，推薦使用Bouin固定法作為起點(diǎn)。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心