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原代細胞培養(yǎng)中的支原體污染的預(yù)防及處理

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2018年06月19日 16:42  

原代細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和菜氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。

    支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(某些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染,等等。

       組織細胞培養(yǎng)工作中,可以從以下幾方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基沖加入適量的抗生素(antibiotic)。

     抗生素(antibiotic)主要用于消毒培養(yǎng)液,是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法。不同抗生素(antibiotic)殺滅微生物不同,應(yīng)根據(jù)需要選擇。

    在細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)破碎的細胞甚多,培養(yǎng)細胞需要頻繁改善營養(yǎng)環(huán)境才能支持長期傳代培養(yǎng)時,應(yīng)該懷疑支原體污染。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化,培養(yǎng)液也不渾濁。

     支原體污染原代細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有:抗生素(antibiotic)處理、抗血清處理、抗生素(antibiotic)加抗血清和補體聯(lián)合處理。要注意的是:支原體沒有細胞壁(cell wall),故作用于細胞壁(cell wall)生物合成的抗生素(antibiotic),如內(nèi)酰胺類、萬古霉素等是不敏感的;對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火*。對支原體zui有抑制活性抗生素(antibiotic)是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等,氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養(yǎng)用物。通常,濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。

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原代細胞

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