原代細(xì)胞的培養(yǎng)，支原體污染是個(gè)世界性的問(wèn)題。支原體污染幾乎可以改變細(xì)胞的所有參數(shù)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確、甚至*錯(cuò)誤。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測(cè)。相信會(huì)有越來(lái)越多的高水平期刊將做出同樣的支原體檢測(cè)要求。

支原體通過(guò)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物及消耗各種養(yǎng)分，如核酸前體及必需氨基酸，從而改變細(xì)胞的代謝狀態(tài)。支原體可以酵解糖，分解精氨酸，氧化丙酮酸，解脲支原體可以利用尿素作為能源，這會(huì)使細(xì)胞代謝發(fā)生一系列改變，從而影響蛋白質(zhì)、DAN、RNA合成以及嘌呤從頭合成及補(bǔ)償合成途徑。污染時(shí)間的長(zhǎng)短及核酸代謝改變決定了支原體污染造成的危害程度，導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、重排、非整倍體的出現(xiàn)。隨后，細(xì)胞的生長(zhǎng)特性發(fā)生改變，使某些酶和細(xì)胞因子的產(chǎn)生增加，并表現(xiàn)出一些特殊的細(xì)胞功能，而其它一些細(xì)胞正常的功能則被抑制。某些支原體附著在細(xì)胞表面后，會(huì)與宿主細(xì)胞交換膜抗原成分。隨著細(xì)胞膜成分的改變，細(xì)胞的形態(tài)及抗原性發(fā)生改變。細(xì)胞污染對(duì)研究工作帶來(lái)的zui大危害是由于錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果導(dǎo)致研究誤入歧途。此外，支原體污染還會(huì)干擾細(xì)胞的篩選，如雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制并喪失產(chǎn)生單抗的能力。

培養(yǎng)法是zui可靠的支原體檢測(cè)技術(shù)，但是該方法非常耗時(shí)的，需要數(shù)周，不適合作為細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體污染的快速檢測(cè)。有的實(shí)驗(yàn)室使用熒光染色法檢測(cè)支原體，但是該方法靈敏度太低，當(dāng)檢測(cè)成陽(yáng)性時(shí)，細(xì)胞經(jīng)常已經(jīng)嚴(yán)重污染。目前，細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體污染的檢測(cè)通常使用的是PCR法。

可以說(shuō)，到目前為止，針對(duì)體外細(xì)胞培養(yǎng)的支原體檢測(cè)的方法還沒(méi)有一種單獨(dú)使用就可以保證100%正確，既不會(huì)漏檢（假陰性），也不會(huì)多檢（假陽(yáng)性）。

（1）支原體固體培養(yǎng)法。通過(guò)固體培養(yǎng)法無(wú)法檢測(cè)污染細(xì)胞的一種zui常見(jiàn)的支原體，即豬鼻支原體（M.Hyorhinis）。這是因?yàn)樨i鼻支原體無(wú)法在支原體固體培養(yǎng)基上形成可見(jiàn)的菌落，而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。這就意味支原體固體培養(yǎng)法漏檢率高達(dá)20-50%。

（2）PCR法。PCR法導(dǎo)致的假陽(yáng)性大家比較熟悉，無(wú)需多說(shuō)。值得注意的是，由于細(xì)胞培養(yǎng)液中，經(jīng)常會(huì)含有強(qiáng)烈抑制PCR擴(kuò)增的代謝產(chǎn)物，如果不進(jìn)行樣品的前處理而直接使用細(xì)胞培養(yǎng)原液進(jìn)行PCR檢測(cè)，產(chǎn)生假陰性的概率是非常大的。

（3）熒光染色法。由于該方法本身的靈敏度較低，輕度的支原體污染往往無(wú)法檢測(cè)出來(lái)。該方法漏檢率也不會(huì)低。

（4）各種宣稱檢測(cè)支原體特異性酶的方法，我們對(duì)此持謹(jǐn)慎態(tài)度。比如Lonza公司的依據(jù)支原體特異性酶而設(shè)計(jì)的支原體檢測(cè)試劑盒，其說(shuō)明書就明確寫明：其結(jié)果會(huì)受到原代細(xì)胞本身的干擾，其檢測(cè)過(guò)程必須離心去除哺乳動(dòng)物細(xì)胞。這就是悖論：該支原體檢測(cè)試劑盒不是宣稱根據(jù)支原體特異性酶而設(shè)計(jì)的嗎？怎么會(huì)被哺乳動(dòng)物細(xì)胞本身干擾呢？如果會(huì)被哺乳動(dòng)物細(xì)胞本身干擾，那豈不說(shuō)明哺乳動(dòng)物細(xì)胞本身也含有該酶？如此，假陽(yáng)性豈能避免？由于類似的支原體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書都沒(méi)有公布具體的支原體特異性酶的名稱，其是否會(huì)被哺乳動(dòng)物或普通的細(xì)菌、真菌干擾而產(chǎn)生假陽(yáng)性，我們對(duì)此持高度謹(jǐn)慎態(tài)度。希望進(jìn)行細(xì)胞支原體污染檢測(cè)的具體人員自己好好研究鑒別一下。再者，其靈敏度如何也需要比較后才知道。

 Phospho-IRAK1 (Ser376) 泛素蛋白連接酶抗體

 Phospho-IRAK1 (Thr209) 泛素蛋白抗體

 Phospho-IRAK1 (Thr387) 翻譯延伸因子EF-1a抗體

 phospho-IRAK4 (Thr345) 翻譯控制腫瘤蛋白抗體

 Phospho-IRF3 (Ser396) 發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-5抗體

 Phospho-IRF7 (Ser471/472) 發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體

 phospho-IRS1(Ser1101) 發(fā)動(dòng)蛋白樣相關(guān)蛋白1抗體

 phospho-IRS1(Ser302) 二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶抗體

 phospho-IRS1(Ser307) 二甲基化組蛋白H3抗體

 phospho-IRS1(Ser332/336) 二甲基化組蛋白H3抗體
原代細(xì)胞