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甲基化特異性PCR
標(biāo)簽： 甲基化 特異性 PCR
DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應(yīng)，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯yi存在的化學(xué)性修飾堿基。
- 亞硫酸氫鈉法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | MSP是一種簡(jiǎn)便、特異的、敏感的檢測(cè)單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因 組DNA，未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，然后用3對(duì)特異性的引物對(duì)所測(cè)基因的同一核苷酸序列進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物用DNA瓊脂糖凝膠電泳，凝膠掃描觀察分析結(jié)果。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | DNA |
| 試劑、試劑盒 | 亞硫酸氫鈉、氫醌、石蠟油、乙醇 |
| 儀器、耗材 | 水浴鍋、PCR儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 在50 μl 體系中，DNA（2~5 μg）經(jīng)NaOH（終濃度值0.2 mol/L）在37℃變性10 Min。
|
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