国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>操作使用>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

甲基化特異性PCR

來源:上海希言科學(xué)儀器有限公司   2018年07月19日 11:16  

甲基化特異性PCR

標(biāo)簽: 甲基化 特異性 PCR

DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應(yīng),在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯yi存在的化學(xué)性修飾堿基。

  • 亞硫酸氫鈉法
實(shí)驗(yàn)方法原理MSP是一種簡(jiǎn)便、特異的、敏感的檢測(cè)單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因 組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,然后用3對(duì)特異性的引物對(duì)所測(cè)基因的同一核苷酸序列進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物用DNA瓊脂糖凝膠電泳,凝膠掃描觀察分析結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)材料

DNA

試劑、試劑盒

亞硫酸氫鈉、氫醌、石蠟油、乙醇

儀器、耗材

水浴鍋、PCR儀

實(shí)驗(yàn)步驟

1.  在50 μl 體系中,DNA(2~5 μg)經(jīng)NaOH(終濃度值0.2 mol/L)在37℃變性10 Min。

2.  對(duì)于ng級(jí)別的人基因組DNA,在進(jìn)行修飾前加入2μg蛙魚精DNA為載體。


3.  加入30 μl 剛配制好的10 mmo/L 氫醌與520/1的40.5%亞硫酸氫鈉混勻。

4.  然后用石蠟油隔絕空氣的條件下,避光在50%溫育16 h。


5.  修飾后的DNA過WizerdDNA純化柱,用50/1 L 水洗脫。

6.  室溫下用NaOH(終濃度為0.3 mol/L)修飾5 min,之后用乙醇沉淀。


7.  DNA溶于20 μl 水中,立即使用或在-20℃保存。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
竹山县| 崇仁县| 双江| 祁东县| 鞍山市| 蓬安县| 嫩江县| 犍为县| 三明市| 库伦旗| 天水市| 沂水县| 高雄县| 湘乡市| 砚山县| 阿克苏市| 津市市| 靖西县| 木里| 延津县| 鄱阳县| 嘉兴市| 郎溪县| 齐河县| 桦甸市| 贵港市| 肇庆市| 奉化市| 浮山县| 大城县| 潞西市| 广东省| 公安县| 长春市| 五家渠市| 孟州市| 新晃| 招远市| 洱源县| 正定县| 驻马店市|