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色譜法的分類 (中級)--山東魯南瑞虹公司駐浙辦

來源:山東魯南瑞虹化工儀器有限公司   2007年11月08日 11:52  

1) 按兩相狀態(tài)分類:以流動相狀態(tài)為標準劃分類型。用氣體作為流動相的色譜法稱為氣相色譜法Gaschromatography (GC);用液體作為流動相的色譜法稱為液相色譜法 Liquid chromatography LC.
 ?。?) 按樣品組分在兩相間的分離機理分類:利用組分在流動相和固定相之間的分離原理不同而命名的分類方法。包括,吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法、凝膠色譜法、凝膠滲透色譜法、離子色譜法和超臨界流體色譜法等十余種方法。
 ?。?) 按色譜技術(shù)分類:為提高組分的分離效能和高選擇性,采取了許多技術(shù)措施,根據(jù)這些色譜技術(shù)的性質(zhì)不同而形成的色譜分類法。例如,程序升溫氣相色譜法、反應氣相色譜法、裂解氣相色譜法、頂空氣相色譜法、毛細管氣相色譜法、多維氣相色譜法、制備色譜法等七種方法。
 ?。?) 按固定相存在形態(tài)分類:根據(jù)固定相在色譜分離系統(tǒng)中存在的形狀,可分為柱色譜法(其中又含填充柱色譜法和開管柱色譜法)、平面色譜法(其中又含紙色譜法和薄層色譜法)等九種方法。
 ?。?) 按色譜動力學分類:根據(jù)流動相洗脫的動力學過程不同而進行分類的色譜法,例如,沖洗色譜法、頂替色譜法和迎頭色譜法等。
                  液相色譜法的分類詳解
1、按溶質(zhì)在兩相分離過程的物理化學原理分類:
  (1)吸附色譜(Adsorption Chromatography)用固體吸附劑作固定相,以不同溶劑作流動相,依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實現(xiàn)分離。
 ?。?)分配色譜(Partition Chromatography)用載體在固相基體上的固定液作固定相,以不同極性溶劑作流動相,依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動相對極性的差別,又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當固定相的極性大于流動相的極性時,可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜(Normal Phase Chromatography);若固定相的極性小于流動相的極性時,可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜(Reversed Phase Chromatography)。
 ?。?)離子色譜(Ion Chromatography) 用微粒離子交換劑作固定相,以具有一定PH值的緩沖溶液作流動相,依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團進行可逆性離子交換能力的差別而實現(xiàn)分離。
 ?。?)體積排阻色譜(Size Exclusion Chromatography) 用化學惰性的多孔性凝膠作固定相,按固定相對樣品中各組分分子體積阻滯作用的差別來實現(xiàn)分離。
 ?。?) 親和色譜(Affinity Chromatography) 以在不同基體上,鍵合多種不同特征的配體作固定相,用不同PH值的緩沖溶液作流動相,依據(jù)生物分子(氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、核酸、核苷酸、核酸、酶等)與基體上鍵連的配位體之間存在的特異性親和作用能力的差別,而實現(xiàn)對具有生物活性的生物分子的分離。
 2 按溶質(zhì)在色譜柱洗脫的動力學過程分類:
 ?。?)洗脫法(elution method) 又稱淋洗法,如將含三組分的樣品注入色譜柱,流動相連續(xù)流過色譜柱,并攜帶樣品組分在柱內(nèi)向前移動,經(jīng)色譜分離后,樣品中不同組分依據(jù)與固定相和流動相相互作用的差別,而順序流出色譜柱。
 ?。?)前沿法(frontal method)又稱迎頭法,如將含三個等量組分的樣品溶于流動相,組成混合物溶液,并連續(xù)注入色譜柱,由于溶質(zhì)的不同組分與固定相的作用力不同,則與固定相作用zui弱的*個組分首先流出,其次是第二個組分與*個組分混合流出,zui后是與固定相作用zui強的第三個組分與第二個和*個組分混合流出。此法僅*個組分純度較高,其他流出物皆為混合物,不能實現(xiàn)各個組分的*分離,現(xiàn)已較少采用。
 ?。?) 置換法(displacement method) 又稱頂替法,當含三種組分的混合物樣品注入色譜柱后,各組分皆與固定相有強作用力,若使用一般流動相無法將他們洗脫下來,為此可使用一種比樣品組分與固定相間作用力更強的置換劑(或稱頂替劑)作流動相,當它注入色譜柱后,可迫使滯留在柱上的各個組分,依其與固定相作用力的差別而依次洗脫下來,且各譜帶皆為各個組分的純品。置換法現(xiàn)已在大規(guī)模制備色譜中獲廣泛應用,在生物大分子純品制備中取得良好的效果

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