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亮發(fā)光桿菌馴化育種:孢子分離法

來源:上海一研生物科技有限公司   2018年07月26日 11:28  

    亮發(fā)光桿菌該法是采用采用成熟的擔(dān)孢子萌發(fā)培養(yǎng)成菌絲體而得到純菌種的方法。擔(dān)孢子具備親本的遺傳特性,但變異的機會多,生命力強,可能選育出優(yōu)良的菌株。“種茹”的選擇要求與組織分離法一樣,但成熟度要求八九分成熟的金針茹子實體,因為這時的孢子萌發(fā)力強,數(shù)量多,分離之后可供挑選的機會多。孢子分離法有單孢分離與多孢分離兩種方法,馴化育種采用的是多孢子分離法,該法又分為“種茹”孢子彈射法和菌褶貼管壁法兩種。 
    (1)“種茹”孢子彈射法:取“種茹”切去菌柄,表面用70%的酒精擦洗干凈或浸入0.1%的升水中1~2min,無菌水沖洗數(shù)遍后,用濾紙吸干表面水分。在接種箱或無菌室內(nèi)按無菌操作規(guī)程將“種茹”的菌褶朝下,用鐵絲支撐置于培養(yǎng)皿上,放在消毒擦洗過和大型鐘罩下,把滅菌過的濾紙置于培養(yǎng)皿容器內(nèi)。整個裝置要讓之通氣,否則罩內(nèi)濕度過大,孢子反而不易落下。經(jīng)過12~20h,就可以看到在培養(yǎng)皿內(nèi)或濾紙上散落一層白色的孢子印。用無菌接種環(huán)沾取少量的孢子,置于盛有無菌生理鹽水的大試管或三角燒瓶中稀釋,制成孢子懸浮液,再用無菌的注射針筒或滴管,吸取孢子懸浮液,注入1~2滴孢子液于培養(yǎng)基表面,并用無菌接種環(huán)涂布培養(yǎng),待孢子萌發(fā)后挑取孢子萌發(fā)早、長勢好的菌落進行轉(zhuǎn)管培養(yǎng)。 
    (2)菌褶貼管壁法:鉤取一塊干凈、發(fā)育良好的金針茹菌褶,在無菌操作條件下,貼在斜面培養(yǎng)基上方的試管內(nèi)壁上,為了讓之貼牢,可加1~2滴無菌水在試管壁上。放好菌褶后,塞入棉塞,置于適溫條件下培養(yǎng)。待看到培養(yǎng)基上產(chǎn)生與菌褶相應(yīng)大小的霧狀物時,立即將附在試管壁上的菌褶片在無菌條件下取出。待長成肉眼可見的菌絲時,挑取并放入新的試管培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。 
    亮發(fā)光桿菌孢子分離污染率較高,要剔除肉眼可見的各種雜菌。之后,挑取的各菌株一定要經(jīng)過出茹試驗來鑒定是否是優(yōu)良的馴化菌株。

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亮發(fā)光桿菌

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